【摘要】：奶牛胎衣不下是指以產(chǎn)后12 h內(nèi)未將胎衣排出體外為主要特征的一種疾病,是導致奶牛繁殖效率低下的主要原因之一。車前子作為一種傳統(tǒng)的中藥,在臨床的應用中發(fā)現(xiàn)車前子治療奶牛胎衣不下有著很好的效果。本實驗室通過實驗研究確定了酒炙車前子治療奶牛胎衣不下的有效部位,但有效部位中治療奶牛胎衣不下的活性組分尚不明確。因此,本試驗的目的是確定酒炙車前子治療奶牛胎衣不下有效部位中化合物的分離體系,并驗證化合物對治療奶牛胎衣不下的效果。為確定并分析酒炙車前子中治療奶牛胎衣不下有效物質(zhì)的化學式結(jié)構(gòu)提供試驗基礎。為研發(fā)具有高效、毒副作用小和廉價等優(yōu)點的治療奶牛胎衣不下的藥物提供理論基礎。試驗一通過有機溶劑石油醚、二氯甲烷和乙酸乙酯對酒炙后的車前子進行萃取,通過使用硅膠柱層析技術(shù)和TLC技術(shù)進行篩選萃取液中化合物的分離體系。試驗二通過使用試驗一確定的分離體系對有效部位中的化合物進行分離,并統(tǒng)計化合物回收率。試驗三通過使用試驗二所分離出的化合物進行動物試驗,隨機將30頭奶牛分成6組,每組5頭。設置化合物Ⅰ組、化合物Ⅱ組、化合物Ⅲ組、化合物Ⅳ組、化合物Ⅴ組和化合物Ⅵ組,每組動物在灌服藥物后的48 h觀察胎衣排出情況,并記錄胎衣排出時間。試驗一的結(jié)果顯示,將柱體高度分成15 cm、25 cm和35 cm,二氯甲烷部位的化合物回收率分別為:73.21%、64.71%、45.26%;乙酸乙酯部位的化合物回收率分別為:10.98%、62.49%、45.39%。按照極性由低到高,二氯甲烷部位分離化合物的洗脫劑體系如下:1)、石油醚:乙酸乙酯為1:2;2)、石油醚:乙酸乙酯為1:30;3)、二氯甲烷:甲醇為30:1;展開劑體系為石油醚:乙酸乙酯,比例為4:1,乙酸乙酯部位分離化合物的洗脫劑體系如下:1)、石油醚:乙酸乙酯為100:1;2)、石油醚:乙酸乙酯為30:1;3)、二氯甲烷:甲醇為30:1;展開劑體系為石油醚:乙酸乙酯,比例為10:1。通過TLC結(jié)果可發(fā)現(xiàn):在柱體高度同為15 cm的情況下,二氯甲烷部位和乙酸乙酯部位中的化合物無法被成功分離成三個部分。在柱體高度同為25 cm和35 cm的條件下,二氯甲烷部位和乙酸乙酯部位中的化合物可被分離成三部分化合物。試驗二的結(jié)果顯示:二氯甲烷部位中分離出的三部分化合物質(zhì)量分別為:化合物Ⅰ為0.234 g;化合物Ⅱ為0.571 g;化合物Ⅲ為3.024 g,總質(zhì)量為3.829 g,化合物回收比例為55.93%;乙酸乙酯部位中分離出的三部分化合物質(zhì)量分別為:化合物Ⅳ為0.218g;化合物Ⅴ為0.085 g;化合物Ⅵ為0.753 g;總質(zhì)量為1.056 g,化合物回收比例為51.39%。試驗三結(jié)果顯示:二氯甲烷部位中所分離出的化合物Ⅰ、化合物Ⅱ和化合物Ⅲ的治愈率分別為:40%、20%和60%,15頭患病奶牛共治愈6頭,總治愈率為40%;乙酸乙酯部位中所分離出的化合物Ⅳ、化合物Ⅴ和化合物Ⅵ的治愈率分別為:20%、20%和40%,15頭患病奶牛共治愈4頭,總治愈率為26.67%。上述試驗結(jié)果表明:選用內(nèi)徑6 cm、容積為500 mL的層析柱,硅膠填充的高度為25cm最佳。二氯甲烷部位中所分離出的化合物Ⅲ的療效顯著,治愈率達到60%。乙酸乙酯部位中所分離出的化合物Ⅵ的療效果明顯,其治愈率為40%,提示了酒炙車前子發(fā)揮治療效果的主要活性組分是化合物Ⅲ和化合物Ⅵ。
【學位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S858.23
【圖文】：

酒炙車前子治療奶牛胎衣不下活性組分的分離及其療效分析2.4.2 TLC 結(jié)果2.4.2.1 二氯甲烷部位柱體高度為 15 cm 的條件下，結(jié)果如圖 2-1 所示：圖 1 的 A、B、C 各有 3 個原料點，每個點中的化合物濃度依次從高到低，能夠觀察到濃度越大化合物點越清晰但會出現(xiàn)拖尾情況。并且觀察圖 1 的 A、B、C 可發(fā)現(xiàn)，使用不同極性的洗脫劑進行洗脫后，各組間均存在著化合物分不開的情況。

酒炙車前子治療奶牛胎衣不下活性組分分離體系的分析與確定柱體高度為 25 cm 的條件下，結(jié)果如圖 2-2 所示：圖 2A 中可觀察到 3 個化合物點，并且發(fā)生拖尾的情況；圖 2B、C 各有一個點，沒有發(fā)生化合物交叉的情況。

酒炙車前子治療奶牛胎衣不下活性組分的分離及其療效分析柱體高度為 35 cm 的條件下，結(jié)果如圖 2-3 所示：圖 3A 有三個化合物點；圖 3B 有一個化合物點并發(fā)生拖尾情況；圖 3C 有一個化合物點。圖 3B、C 之間未出現(xiàn)化合物交叉的情況。

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