【摘要】：本試驗以豬腸上皮細胞作為受試對象,以槲皮素作為受試物,將槲皮素溶解在二甲基亞砜(DMSO)中,通過在細胞培養(yǎng)液中添加0.2%DMSO及不同濃度的槲皮素,探討槲皮素對豬腸上皮細胞利用蛋白質(zhì)的作用及機制。試驗結(jié)果表明:(1)與對照組相比,0.001~1 mg/L槲皮素均能促進細胞增殖,其中1 mg/L槲皮素作用效果最好。在上述試驗基礎上,對槲皮素的適宜濃度進一步篩選。發(fā)現(xiàn)24~144 h內(nèi),槲皮素的半數(shù)有效濃度分別為0.50、4.17、1.10、2.08、3.52、5.43 mg/L。(2)通過BCA法檢測細胞內(nèi)蛋白質(zhì)含量發(fā)現(xiàn),與對照組相比,槲皮素作用24 h時,試驗各組間無顯著差異(P0.05);作用48 h時,0.4、0.8、1.6 mg/L槲皮素組細胞內(nèi)蛋白質(zhì)含量顯著增加(P0.05);作用72 h時,0.4 mg/L槲皮素組細胞內(nèi)蛋白質(zhì)含量顯著增加(P0.05)。(3)通過熒光定量法檢測細胞內(nèi)轉(zhuǎn)運載體表達發(fā)現(xiàn),與對照組相比,1.6 mg/L槲皮素作用24 h可極顯著提高載體ASCT2、ATA2、rBAT、小肽轉(zhuǎn)運載體mRNA表達(P0.01);作用48 h,可極顯著提高載體rBAT、y~+LAT1、y~+LAT2 mRNA表達(P0.01),顯著提高小肽轉(zhuǎn)運載體mRNA表達(P0.05);作用72 h,可極顯著提高載體EAAC1、ASCT2、ATA2、LAT2、CAT-1、rBAT、y~+LAT1 mRNA表達(P0.01),顯著提高小肽轉(zhuǎn)運載體mRNA表達(P0.05)。結(jié)果表明,1.6 mg/L槲皮素作用效果較顯著,能促進氨基酸、小肽轉(zhuǎn)運載體表達。(4)通過熒光定量法檢測細胞內(nèi)信號通路表達發(fā)現(xiàn),與對照組相比,作用24 h時,1.6mg/L槲皮素可顯著提高結(jié)節(jié)性硬化復合物1(TSC1)mRNA表達(P0.05),極顯著提高雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、真核起始因子結(jié)合蛋白1(4E-BP1)、真核起始因子4B(eIF4B)、真核起始因子4A(eIF4A)、核糖體蛋白S6(RPS6)mRNA表達(P0.01);作用48 h時,顯著提高真核起始因子4E(eIF4E)mRNA表達(P0.05),極顯著提高4E-BP1、核糖體蛋白S6激酶1(S6K1)mRNA基因表達(P0.01);作用72 h時,極顯著提高mTOR、4E-BP1、eIF4E、eIF4B、eIF4A、RPS6 mRNA表達(P0.01)。(5)通過Western Blot試驗發(fā)現(xiàn),與對照組相比,1.6 mg/L槲皮素極顯著提高mTOR、eIF4A、eIF4E蛋白表達,極顯著降低4E-BP1蛋白表達(P0.01)。1.6 mg/L槲皮素作用效果較顯著,可通過提高信號通路蛋白在mRNA、蛋白水平的表達,激活mTOR信號通路,促進細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的合成。綜上所述,培養(yǎng)液中添加1.6 mg/L槲皮素能促進細胞增殖,提高細胞內(nèi)蛋白質(zhì)含量,此作用可能是通過促進氨基酸和小肽轉(zhuǎn)運載體表達以及激活mTOR信號通路來實現(xiàn)的。
【學位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S828.5
【圖文】：

]。AA 肉雞飼糧中添加沙棘黃酮可提高胸肌肌苷酸含量及腺苷量，從而緩解熱應激導致的肉質(zhì)風味下降[77]。實驗已證實，黃酮類化合物作為飼料添加劑適量添加可改善動，促進蛋白質(zhì)消化吸收，增強蛋白質(zhì)利用率，而槲皮素作為黃成分，具有相同的功能，但具體促進蛋白質(zhì)利用的機制目前尚的生理功能及安全性素概述名槲皮黃素、櫟精，是從天然植物中提取的重要的黃酮類化合化學命名法命名為 3，3’，4’，5，7-五羥基黃酮，是一種多，溶于甲醇、冰醋酸、丙酮和堿等[78]。人們?nèi)粘Ｉ钪薪?jīng)常食，多種植物組織中均含有槲皮素及其衍生物。目前已發(fā)現(xiàn)超過菊花、山楂、槐花及魚腥草、銀杏葉等，在植物的花、葉及果在槐花中含量高達 4%[79]。二水槲皮素為黃色針狀結(jié)晶，在 3于熱乙醇溶液[80]。

3 結(jié)果與分析3.1 槲皮素對豬腸上皮細胞增殖的影響3.1.1 MTT 法檢測槲皮素促進豬腸上皮細胞增殖的適宜濃度設置 10 倍濃度梯度，對槲皮素的有效作用濃度進行初步篩選，通過 MTT 法檢測 0.01、0.01、0.1、1、10 mg/L 槲皮素作用 10 天對豬腸上皮細胞增殖的作用。由圖 3-1 可知，0.001~1mg/L 槲皮素與對照組相比，均能促進細胞增殖，其中 1 mg/L 槲皮素作用效果最好。

對豬腸上皮細胞雷帕霉素靶蛋白信號通路CR 試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn) 72 h 結(jié)果較顯著，在 72 h 基礎上，選擇信、4E-BP1、eIF4A、eIF4E，通過 Western Blot 法進一步進行對雷帕霉素靶蛋白蛋白表達的影響可知，與對照組相比，0.1 mg/L 槲皮素可顯著提高細胞內(nèi) .6 mg/L 槲皮素可極顯著提高細胞內(nèi) mTOR 蛋白表達（P<0.0

【參考文獻】

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1 李光燃;譚碧娥;管桂萍;印遇龍;;鈉離子依賴性中性氨基酸轉(zhuǎn)運載體2特性、表達調(diào)控及功能[J];動物營養(yǎng)學報;2015年11期

2 黃博;胡佳宇;吳苗苗;肖昊;張軍;譚碧娥;印遇龍;;豬胃腸道谷氨酸代謝及其對機體健康的影響[J];動物營養(yǎng)學報;2015年11期

3 趙雪巍;劉培玉;劉丹;孫珊珊;李貞;余可馨;張Z誒

本文編號：2772324