【摘要】：FSH與顆粒細(xì)胞表面上的同源受體FSHR結(jié)合可以激活腺苷酸環(huán)化酶(AC)和磷脂酶C(PLC),從而產(chǎn)生cAMP,IP_3和二�；视�(DAG)。這些第二信使通過(guò)幾種機(jī)制進(jìn)一步導(dǎo)致下游信號(hào)級(jí)聯(lián)的激活,cAMP-鳥(niǎo)嘌呤交換因子(cAMP-GEF)反過(guò)來(lái)又可以激活一些蛋白激酶,如:GTP結(jié)合蛋白(RAP1/RAP2/RAS),這些蛋白又可以進(jìn)一步激活ERK1/2或p38MAPK。這些蛋白激酶通過(guò)激活不同的轉(zhuǎn)錄因子,使這些因子磷酸化最終導(dǎo)致顆粒細(xì)胞內(nèi)類(lèi)固醇生成,并促進(jìn)顆粒細(xì)胞增殖或存活。促卵泡激素受體結(jié)合抑制劑(Follicle stimulating hormone receptor binding inhibitor,FRBI)是從人和綿羊卵泡液中提取并經(jīng)過(guò)反相高效液相色譜進(jìn)一步純化得到的一種8肽化合物,它能顆粒細(xì)胞外通過(guò)抑制FSH與FSHR的結(jié)合作用,使信號(hào)傳導(dǎo)受到抑制,進(jìn)而影響顆粒細(xì)胞的增殖。目前的研究多數(shù)是同時(shí)應(yīng)用FSH和FRBI對(duì)動(dòng)物體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。而單獨(dú)應(yīng)用FRBI能否有效抑制FSH的功能及多大劑量效果最佳,尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究首先將注射FRBI的小鼠分為M-20、M-30和M-40三個(gè)組,分別肌肉注射20、30和40 mg/kg FRBI;陽(yáng)性對(duì)照組(M-FSH組)注射10 IU/只FSH;對(duì)照組(M-CG組)注射0.2 mL生理鹽水,每組連續(xù)注射5d。稱(chēng)量每只小鼠雙側(cè)卵巢的重量,HE染色法制作組織切片測(cè)定卵巢組織切片中皮質(zhì)厚度(OCT)和次級(jí)卵泡形態(tài)大小;ELISA法測(cè)定血清FSH和E_2濃度,RT-PCR檢測(cè)FSHR和ERα的表達(dá),Western Blot檢測(cè)卵巢FSHR和ERα表達(dá)。其次,在5%CO_2濃度、飽和濕度條件下觀察卵母細(xì)胞在36~39℃六個(gè)不同溫度在22~30h出現(xiàn)第一極體的數(shù)量;根據(jù)上述條件將卵母細(xì)胞培養(yǎng)于0、5、10、15、20IU/mL FSH和10、20、30、40μg/mL FRBI的培養(yǎng)基中,觀察卵母細(xì)胞出現(xiàn)極體第一極體的數(shù)量。最后,將綿羊卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體(COC)隨機(jī)分為五個(gè)實(shí)驗(yàn)組(O-CG組、O-10組、O-20組、O-30組、O-40組)和一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照組(O-FSH組);實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)基中分別添加0、10、20、30和40μg/mL FRBI,陽(yáng)性對(duì)照組的培養(yǎng)基中添加10IU/mL FSH,卵母細(xì)胞成熟后收集細(xì)胞培養(yǎng)液用于ELISA方法檢測(cè)培養(yǎng)液中cAMP、IP3信號(hào)通路的變化;用Western Blot檢測(cè)卵母細(xì)胞中FSHR、ERβ和PKA蛋白的表達(dá)水平;RT-PCR檢測(cè)卵母細(xì)胞中FSHR、ERβ基因表達(dá)。研究結(jié)果表明,FSH治療可以增加次級(jí)卵泡和成熟卵泡的數(shù)量,增加卵泡發(fā)育;而FRBI的治療會(huì)降低次級(jí)卵泡和成熟卵泡的數(shù)量,并抑制小鼠的卵泡發(fā)育。此外,FRBI降低血清FSH和E2濃度,下調(diào)卵巢FSHR和ERα蛋白表達(dá)和mRNA表達(dá)水平。綿羊卵母細(xì)胞在10IU/mL FSH及38.5℃條件下培養(yǎng)26h成熟率最高;隨著FRBI濃度升高,卵母細(xì)胞在38.5℃條件下培養(yǎng)26h,第一極體數(shù)量逐漸減少。FRBI能夠降低綿羊卵母細(xì)胞上FSHR、ERβ基因和FSHR、ERβ及PKA蛋白表達(dá)水平。
【學(xué)位授予單位】：西北民族大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：S852.2
【圖文】：

圖 2-1 第 20d 卵巢和卵泡的組織學(xué)觀察(×100，比例尺=10μm)。A:M-CG 組; B:M-FSH 組;C:M-20 組; D:M-30 組; E:M-40 組。Fig.2-1 Histological observation of ovaries and follicles on day 20 (×100, scale bar =10 m).A:M-Control group (M-CG); B:M-FSH group; C:M-20group;D:M-30group;EM-40group.2.2 小鼠皮質(zhì)厚度(OCT)為了研究 FRBI 治療卵巢發(fā)育的影響，分別檢測(cè)卵巢重量和卵巢皮質(zhì)厚度。與M-CG組相比, 三個(gè)注射FRBI 的小鼠組卵巢重量與FSH 治療組相比呈劑量依賴(lài)性(數(shù)據(jù)省略)，但是各組之間沒(méi)有顯著的差異性。 本研究結(jié)果與 KALLA 研究結(jié)果一致[77]。如圖 2-2 所示，隨著日齡的增加，各組小鼠 OCT 逐漸增大。與 M-CG 相比，M-FSH 組的 OCT 略有增加。與 M-CG 和 M-FSH 組相比，三個(gè)注射 FRBI 的小鼠組的 OCT 降低，其中 M-40 組的最小值。第 30 天，M-40 組的 OCT 與 M-FSH組相比顯著性的降低(#P <0.05)。結(jié)果表明，高劑量的 FBRI(40mg/kg)可以減少小鼠卵巢的皮質(zhì)厚度。

和卵泡的組織學(xué)觀察(×100，比例尺=10μm)。AC:M-20 組; D:M-30 組; E:M-40 組。ical observation of ovaries and follicles on day 20 (×roup (M-CG); B:M-FSH group; C:M-20group;D:M-3度(OCT)RBI 治療卵巢發(fā)育的影響，分別檢測(cè)卵巢重, 三個(gè)注射FRBI 的小鼠組卵巢重量與FSH，但是各組之間沒(méi)有顯著的差異性。 本研究示，隨著日齡的增加，各組小鼠 OCT 逐漸增T 略有增加。與 M-CG 和 M-FSH 組相比，，其中 M-40 組的最小值。第 30 天，M-40降低(#P <0.05)。結(jié)果表明，高劑量的 FBRI度。

#與 M-FSH 組相比，#P <0.05圖 2-3 次級(jí)卵泡的 MLD 和 MTDFig.2-3 MLD and MTD of secondary follicles2.5 血清 FSH 和 E2濃度如表 2-5 所示，在實(shí)驗(yàn)期間五組小鼠的血清 FSH 濃度都隨著日齡增加而逐漸增加。從第 15天開(kāi)始，M-FSH 組小鼠的血清 FSH 濃度高于 M-CG 組(*P <0.05與 M-CG 組和 M-FSH 組相比，M-20 組，M-30 組和 M-40 組的小鼠的血清 FS濃度降低。在第 20d 和第 30d，M-FSH 組小鼠的血清 FSH 濃度高于 M-20，差異顯著(#P <0.05)；FSH 組小鼠的血清 FSH 濃度與 M-30 組和 M-40 組比較，差異極顯著(##P <0.01)。研究結(jié)果表明，F(xiàn)RBI 能夠降低血清 FSH 濃度。表 2-5 FSH 血清濃度(ng/mL)Table2-5 Serum FSH concentrations (ng/mL)Group 0d 7d 10d 15d 20d 30dM-CG 9.74±1.31 12.24±1.14 15.76±1.68 18.67±1.71 22.56±2.23 26.88±2.4M-FSH 9.54±1.21 15.44±1.24 21.12±1.88 30.35±3.72 39.88±4.56 45.78±5.7M-20 9.82±1.01 11.68±1.19 19.12±1.79 18.6±1.91 21.27±2.32#30.02±3.4## ##

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2771314