【摘要】：初情期是動物從幼年向獲得繁殖能力的過渡時期,也是雌性動物初次發(fā)情并排卵的時期,象征著母畜具備了繁衍生息的能力。初情期啟動機制較為復(fù)雜,目前尚未完全闡明,且以往關(guān)于初情期啟動機制的研究多集中在嚙齒類和靈長類動物,家畜方面的研究相對較少。本研究擬從DNA甲基化角度探索母羊初情期啟動機制,首先利用熒光定量PCR技術(shù)檢測首先利用熒光定量PCR技術(shù)檢測母羊初情期啟動啟動過程中下丘腦DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶1(DNA methyltransferases 1,Dnmt1)和甲基化CPG結(jié)合蛋白(Methyl-CpG-binding protein 2,MeCP2)、促性腺激素釋放激素(Gonadotropin-releasing hormone,GnRH)和KiSS-1基因的表達規(guī)律,其次通過免疫熒光雙標記方法檢測Dnmt1和MeCP2在下丘腦中的分布定位及其與GnRH和KiSS-1蛋白之間的分布關(guān)系。研究結(jié)果如下:利用熒光定量PCR技術(shù)發(fā)現(xiàn),GnRH、KiSS-1、Dnmt1和MeCP2在母羊下丘腦中均有表達,隨著初情期的到來,GnRH和KiSS-1表達量逐漸升高,且初情期顯著高于初情前期和臨近初情期,Dnmt1和MeCP2表達量逐漸降低,且初情期和臨近初情期顯著低于初情前期。通過免疫熒光雙標記方法研究發(fā)現(xiàn)Dnmt1和MeCP2在母羊下丘腦POA(Preoptic Area)和ARC(Arcuate Nucleus)均有分布,在ARC分別與GnRH和Kisspeptin神經(jīng)元存在明顯的共表達模式,隨著初情期啟動時過程中ARC共表達陽性細胞數(shù)量顯著增多。在POA中,GnRH表達較多,且與Dnmt1和MeCP2呈共表達,隨著初情期啟動共表達陽性細胞數(shù)呈下降趨勢。Kisspeptin表達較少,仍與Dnmt1和MeCP2呈共表達,初情期啟動過程中共表達陽性數(shù)量呈下降趨勢。本研究通過檢測母羊初情期啟動過程中下丘腦Dnmt1、MeCP2、GnRH和KiSS-1基因的表達和分布,研究結(jié)果表明,Dnmt1、MeCP2、GnRH和KiSS-1基因在母羊下丘腦中均有表達,且在下丘腦ARC和POA中Dnmt1和MeCP2與GnRH和Kisspeptin之間存在明顯的共表達模式�？梢�,Dnmt1和MeCP2可能通過調(diào)控GnRH和Kisspeptin蛋白的表達參與母羊初情期啟動。
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S826
【圖文】：

圖 1 HPG 軸示意圖Fig.1 HPG axis schematic diagram從表觀遺傳學(xué)角度講，它可以改變 GnRH 神經(jīng)元細胞成熟的化自身是認為改變基因的轉(zhuǎn)錄率通過兩種機制。首先，CPG 甲

圖 2 Kisspeptin 在 HPG 軸中的作用示意圖Figure.2 Schematic diagram of the role of Kisspeptin in the HPG axsspeptin 對生殖系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用于 Kisspeptin 對動物機體的調(diào)節(jié)作用很復(fù)雜，其中對生殖系統(tǒng)的研

圖 3 RNA 瓊脂糖凝膠電泳圖Fig.3 RNA agarose gel electrophoresisnRH、KiSS-1、Dnmt1 和 MeCP2 mRNA 表達為內(nèi)參基因，利用熒光定量 PCR 法檢測 Gn的表達情況，結(jié)果顯示，隨著初情期啟動 GnP<0.05），Dnmt1 和 MeCP2 基因表達量在臨見圖 4 至圖 7：

【參考文獻】

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1 田園;宋敏;方富貴;;動物初情期表觀遺傳調(diào)控的研究進展[J];家畜生態(tài)學(xué)報;2015年04期

2 劉宵;王樹迎;尹玉濤;張德敏;黃麗波;侯衍猛;;濟寧青山羊生后發(fā)育階段GnRH與GnRHR陽性細胞在下丘腦分布規(guī)律的研究[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2012年08期

3 王軍;孫蕾;張濤;周海柱;婁玉杰;;Kisspeptin在初情期前母羊下丘腦的分布定位[J];中國農(nóng)學(xué)通報;2012年20期

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1 蔣書東;方富貴;王然;安好峰;花雯;劉亞杰;趙熙杰;李福寶;;kisspeptin在雌性大鼠初情期發(fā)育進程中下丘腦的表達[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物解剖學(xué)及組織胚胎學(xué)分會第十七次學(xué)術(shù)研討會論文集（上）[C];2012年

本文編號：2765211