塔河馬鹿源副結(jié)核分枝桿菌的分離鑒定及部分生物學特性研究

發(fā)布時間：2020-07-20 12:37

【摘要】：目的:副結(jié)核病又稱約翰病,是由副結(jié)核分枝桿菌引起牛、羊、馬鹿等反芻動物的一種漸進性消瘦和肉芽腫腸炎為主要特征的傳染病。目前,我國馬鹿的存欄約13萬頭,主要有3個品種,分布在塔里木河流域的塔河馬鹿是其中之一,養(yǎng)鹿業(yè)已成為當?shù)匦竽翗I(yè)發(fā)展的重要組成。但由于管理環(huán)節(jié)的缺失和防疫意識的淡薄,導致以腹瀉、消瘦為主要特征的各種疫病高發(fā),發(fā)病原因與副結(jié)核感染有關(guān),但尚未進行相關(guān)的深入研究。為此,本研究以塔河馬鹿為對象,進行以下方面研究:方法:采用現(xiàn)場流行病學調(diào)查的方法,收集塔河流域某馬鹿養(yǎng)殖場的環(huán)境、氣候、病史等現(xiàn)場資料,查找可能的傳染源及傳播途徑;采集塔河流域5個鹿場共214份公鹿血清,采用ELISA方法調(diào)查副結(jié)核病的感染現(xiàn)狀;分別無菌采集疑似副結(jié)核病感染的2頭馬鹿腸內(nèi)容物和腸系膜淋巴結(jié),去污處理后接種于卵黃培養(yǎng)基中進行病原的分離純化;采用生理生化、培養(yǎng)特性結(jié)合16S rRNA、IS900的PCR擴增進行種的鑒定,同時擴增DMC、IS1311基因進行亞型鑒定;選擇最適的培養(yǎng)基并優(yōu)化細菌培養(yǎng)方法;以BALB/c小鼠為試驗模型進行動物回歸試驗。結(jié)果:試驗一塔河馬鹿副結(jié)核病的現(xiàn)場和血清流行病學調(diào)查現(xiàn)場調(diào)查發(fā)現(xiàn),鹿場內(nèi)奶牛是可能的傳染源,糞口途徑為主要的傳播途徑;鹿場間為公鹿的引種更換;血清流行病學調(diào)查結(jié)果表明,5個試驗鹿場均有副結(jié)核病的感染,其總陽性率為7.01%(15/214),最高為11.32%(6/53),最低為2.70%(1/37)。試驗二副結(jié)核分枝桿菌的分離鑒定及培養(yǎng)條件優(yōu)化從腸內(nèi)容物中分離到一株副結(jié)核分枝桿菌,將該菌命名為MAPxj-RD。通過細菌培養(yǎng)查明了MAPxj-RD的生物學特性,16S rRNA、IS900、DMC、IS1311與保護性抗原基因檢測均為陽性,兩種亞型鑒定方法均顯示分離株為C型副結(jié)核分枝桿菌;最適培養(yǎng)基為卵黃培養(yǎng)基;HPC去污比HPC和抗生素共同去污更容易分離到副結(jié)核分枝桿菌;初代接種物二次盲傳后具可分離到副結(jié)核分枝桿菌;當液深4 mm時細菌生長速度更快。試驗三副結(jié)核分枝桿菌MAPxj-RD的動物試驗動物試驗表明,小鼠體重在試驗周期中呈上升趨勢,而檢測糞便后未發(fā)現(xiàn)副結(jié)核分枝桿菌;使用優(yōu)化的培養(yǎng)方法從小鼠的肝臟中成功分離到MAPxj-RD;病理切片經(jīng)抗酸染色與HE染色后均發(fā)現(xiàn)MAPxj-RD的存在,且引起了與副結(jié)核病相似的病理變化;經(jīng)PCR檢測發(fā)現(xiàn)每只小鼠臟器中均有MAPxj-RD,腸組織中檢出率最高,為100%(6/6),腎臟最低,為16.67%(1/6)。結(jié)論:綜上,副結(jié)核病在塔河流域的鹿場已普遍存在,自然環(huán)境與鹿場環(huán)境極利于副結(jié)核病的傳播,該病已成為鹿場的重要傳染病;分離到一株C型副結(jié)核分枝桿菌并命名為MAPxj-RD,查明了MAPxj-RD的生物學特性與分子特性;對細菌培養(yǎng)方法進行了優(yōu)化,并證明該方法可提高分離成功率,縮短培養(yǎng)時間;動物試驗證明MAPxj-RD具有較強的致病性,確為塔河馬鹿發(fā)病的致病菌。
【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S858.23
【圖文】：