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廣西牛羊AKAV感染傳播媒介調(diào)查、病毒分離鑒定與致病性初步研究

發(fā)布時(shí)間:2020-07-19 10:50
【摘要】:赤羽病又名阿卡斑病(Akabane disease,AKAD),是由阿卡斑病毒(Akabanevirus,AKAV)引起的一種蟲(chóng)媒傳染病,其主要侵害牛、羊等反芻動(dòng)物,臨床表現(xiàn)以流產(chǎn)、早產(chǎn)、死產(chǎn)和胎兒的先天性關(guān)節(jié)彎曲—積水性無(wú)腦綜合征(AH綜合征)為主,也有一些毒株可引起新生動(dòng)物的非化膿性腦脊髓炎。赤羽病廣泛分布于非洲、亞洲及大洋洲,通過(guò)嗜血媒介昆蟲(chóng)進(jìn)行傳播。本研究對(duì)采集自廣西共2411份牛和山羊血清樣品(其中山羊血清1428份,采集自12個(gè)市;牛血清983份,采集自13個(gè)市)使用ELISA方法進(jìn)行AKAV抗體檢測(cè)。結(jié)果表明,廣西14個(gè)地市的牛和山羊群中均存在AKAV感染,各地感染情況不一,且牛的陽(yáng)性率顯著高于山羊,牛群總陽(yáng)性率為63.89%,山羊總陽(yáng)性率36.48%。通過(guò)對(duì)各地區(qū)AKAV抗體陽(yáng)性率進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)山羊的AKAV抗體陽(yáng)性率以梧州市最高,為62.50%;牛的AKAV抗體陽(yáng)性率以南寧最高,為82.29%。分析導(dǎo)致AKAV抗體陽(yáng)性動(dòng)物分布的環(huán)境影響因素時(shí)發(fā)現(xiàn),廣西牛和山羊AKAV的感染受到地理位置(緯度)和氣候因素(溫度,降雨量)的影響。本研究在廣西大化縣丹丈屯和板外屯以及興業(yè)縣蒲塘鎮(zhèn)龍旗村設(shè)立的三個(gè)監(jiān)控點(diǎn)中進(jìn)行傳播媒介調(diào)查,共發(fā)現(xiàn)五種庫(kù)蠓,分別為Culicoides oxystoma(尖嗓庫(kù)蠓)、Culicoidesperegrinus(異域庫(kù)螓)、Culicoides arakawae(荒川庫(kù)蠓)、Culicoides humeralis(肩宏庫(kù)蠓)和Culicoides homotomus(原野庫(kù)蠓)。其中異域庫(kù)蠓和尖嗓庫(kù)蠓占比較大,為優(yōu)勢(shì)種屬。本研究在大化丹丈監(jiān)控點(diǎn)山羊血液中分離到一株AKAV,命名為GXDH01,這是我國(guó)首株山羊源AKAV。通過(guò)分段擴(kuò)增的方法獲得GXDH01株的全基因序列,其中L節(jié)段全長(zhǎng)6968bp,M節(jié)段全長(zhǎng)4309bp,S節(jié)段全長(zhǎng)856bp;蛐蛄羞z傳進(jìn)化分析表明,該病毒與分離自牛的日本和韓國(guó)病毒株親緣關(guān)系較近,屬于亞洲群。但L節(jié)段與M、S節(jié)段分別屬于不同的大分支,有發(fā)生基因重組的可能。通過(guò)開(kāi)展GXDH01株對(duì)乳鼠,成年小鼠和竹鼠的致病性研究時(shí)發(fā)現(xiàn),GXDH01株通過(guò)腦內(nèi)接種可使乳鼠死亡,LD50為104.6TCID50;但不能使成年小鼠出現(xiàn)癥狀,該試驗(yàn)結(jié)果與AKAV標(biāo)準(zhǔn)株OBE-1攻毒試驗(yàn)結(jié)果相同。將GXDH01株通過(guò)皮下接種的方式攻毒50日齡幼年竹鼠,可使竹鼠出現(xiàn)神經(jīng)癥狀并死亡。接種劑量為106.9TCID50時(shí),死亡率為66.7%;接種量為105.9TCID50,死亡率為33.3%。死亡竹鼠剖檢可見(jiàn)腦組織和肺臟出血,肝臟出現(xiàn)壞死。病理檢測(cè)可見(jiàn)腦組織血管周圍有單層或多層細(xì)胞浸潤(rùn),形成“血管套”;肝組織內(nèi)見(jiàn)數(shù)個(gè)壞死灶,灶內(nèi)肝細(xì)胞變性、壞死,大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、壞死,血管周圍大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn);肺支氣管及肺泡腔內(nèi)大量中性粒細(xì)胞,局部肺組織內(nèi)出血,肺泡隔增厚。
【學(xué)位授予單位】:廣西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2019
【分類號(hào)】:S855.3
【圖文】:

世界分布,抗體,病毒分離,紅色


AKAV[39】;邋2003年,Huang邋C等在臺(tái)灣無(wú)癥狀的豬身上分離出一株AKAV,并通逡逑過(guò)AKAV抗體檢測(cè)發(fā)現(xiàn),臺(tái)灣的豬群中有很高的AKAV陽(yáng)性率[4氣逡逑綜合上述報(bào)道,繪制AKAV世界分布圖(圖1-1)。由圖可知,AKAV主要的逡逑流行區(qū)域?yàn)閬喼、非洲的部分?guó)家以及澳大利亞。逡逑1邋t逡逑?邋漙逡逑w逡逑圖1-1邋AKAV的世界分布逡逑Fig.邋1-1邋World邋distribution邋of邋AKAV逡逑黑色表示該地區(qū)有AKAV病毒分離和AKAV抗體;紅色表示該地區(qū)僅存在AKAV抗體逡逑Black邋indicates邋AKAV邋virus邋isolation邋and邋AKAV邋antibody邋in邋the邋region.Red邋indicates邋the逡逑presence邋of邋AKAV邋antibody邋alone邋in邋this邋region逡逑4逡逑

示意圖,基因組,示意圖,殘基


Figure邋1-2邋Schematic邋diagram邋of邋S,邋M邋and邋L邋of邋AKAV邋genome逡逑L節(jié)段的ORF編碼唯一產(chǎn)物L蛋白。在其5'和3'端的NCR分別長(zhǎng)30nt和逡逑82nt,鍋柄狀結(jié)構(gòu)長(zhǎng)22bp。如圖1-2所示:除3_端9和19位的2個(gè)殘基外,其余逡逑20個(gè)殘基均可按照“沃森一克里克”法則進(jìn)行配對(duì)。逡逑M節(jié)段的ORF編碼高甘露糖型GP前體(GPC),該GP前體可被宿主細(xì)胞蛋逡逑白酶切割成三個(gè)部分,分別為G2蛋白,NSm蛋白和G1蛋白。其3'-NCR和5'-NCR逡逑分別長(zhǎng)81nt和22nt,鍋柄狀結(jié)構(gòu)序列長(zhǎng)22bp。如圖1-2所示:除3+端8?9位的2逡逑個(gè)殘基外,其余20個(gè)殘基均可配對(duì)[65]。逡逑S節(jié)段的0RF有兩個(gè),且高度重疊,分別編碼N和NSs兩個(gè)蛋白,編碼NSs逡逑蛋白的ORF在N蛋白的內(nèi)部。S節(jié)段的鍋柄狀結(jié)構(gòu)與L和M節(jié)段有所不同,根逡逑據(jù)報(bào)道,其3'-NCR和5'-NCR的長(zhǎng)度分別為123nt和33nt,鍋柄狀結(jié)構(gòu)序列長(zhǎng)24bp,逡逑如圖1-2所示

布尼亞病毒,結(jié)構(gòu)示意圖,殘基


邐L逡逑5邋AGUAGUGUGCCCCUAAAUGCAA逡逑圖1-2AKAV基因組S、M和L示意圖逡逑Figure邋1-2邋Schematic邋diagram邋of邋S,邋M邋and邋L邋of邋AKAV邋genome逡逑L節(jié)段的ORF編碼唯一產(chǎn)物L蛋白。在其5'和3'端的NCR分別長(zhǎng)30nt和逡逑82nt,鍋柄狀結(jié)構(gòu)長(zhǎng)22bp。如圖1-2所示:除3_端9和19位的2個(gè)殘基外,其余逡逑20個(gè)殘基均可按照“沃森一克里克”法則進(jìn)行配對(duì)。逡逑M節(jié)段的ORF編碼高甘露糖型GP前體(GPC),該GP前體可被宿主細(xì)胞蛋逡逑白酶切割成三個(gè)部分,分別為G2蛋白,NSm蛋白和G1蛋白。其3'-NCR和5'-NCR逡逑分別長(zhǎng)81nt和22nt,鍋柄狀結(jié)構(gòu)序列長(zhǎng)22bp。如圖1-2所示:除3+端8?9位的2逡逑個(gè)殘基外,其余20個(gè)殘基均可配對(duì)[65]。逡逑S節(jié)段的0RF有兩個(gè),且高度重疊,分別編碼N和NSs兩個(gè)蛋白,編碼NSs逡逑蛋白的ORF在N蛋白的內(nèi)部。S節(jié)段的鍋柄狀結(jié)構(gòu)與L和M節(jié)段有所不同

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