【摘要】：水貂病毒性腸炎(Mink viral enteritis,MVE)是由水貂腸炎病毒(Mink enteritis virus,MEV)引起水貂一種高度接觸性、急性傳染病,具有高發(fā)病率和高死亡率特點,其中幼貂極易感染。MEV DNA基因組包含兩個主要的開放閱讀框:編碼非結構蛋白NS1和NS2以及結構蛋白VP1和VP2,其中NS1非結構蛋白主要調節(jié)MEV復制,反式激活編碼病毒結構蛋白。目前已經被證實多種細小病毒NS1具有細胞毒性且能誘導細胞凋亡,因此細小病毒NS1一直是研究的熱點。目前MEV及其NS1誘導細胞凋亡的分子機理仍不明確。本研究旨在通過分析MEV及其NS1誘導細胞凋亡的信號途徑及其作用機制,為揭示MEV引起水貂致病機理奠定理論基礎。為了揭示MEV在體內、體外是否能誘導細胞凋亡的發(fā)生。體內方面,我們將MEVB細胞毒株感染健康的水貂,分析體內消化道各個組織細胞凋亡情況。結果分析發(fā)現,感染病毒的水貂消化道組織出現不同程度的病理變化;采用TUNEL方法檢測凋亡細胞,發(fā)現被病毒感染水貂的食管、小腸、腸系膜淋巴結、腎臟中發(fā)現有凋亡細胞,而舌沒有發(fā)現細胞凋亡情況。體外方面研究發(fā)現MEVB感染F81細胞后,能顯著抑制細胞的生長,并且導致細胞在G1期的積累,誘導細胞凋亡的發(fā)生。這些結果表明MEV在體內、體外均能誘導細胞凋亡的發(fā)生。為了進一步確定MEV NS1、NS2、VP1和VP2是否能誘導細胞凋亡的發(fā)生,我們分別構建MEV NS1、NS2、VP1和VP2真核表達質粒,轉染到F81和HEK293T細胞中分析誘導細胞凋亡情況。研究顯示NS1能顯著抑制F81和HEK293T細胞活性,對細胞產生毒性反應,然而VP1和VP2不能抑制細胞活性且不能產生細胞毒性。利用流式細胞術檢測NS1、NS2、VP1和VP2對細胞周期和細胞凋亡情況的影響,結果顯示NS1能導致F81和HEK293T細胞周期阻滯在G1期,同時采用Annexin V-FITC/PI試劑盒檢測發(fā)現,NS1能誘導細胞凋亡的發(fā)生。進一步研究發(fā)現MEV NS1能導致細胞核呈現碎塊狀致密濃染、并且能產生DNA Ladder現象,電鏡發(fā)現染色質濃縮,細胞核凝聚形成大小不等,產生凋亡小體。這些結果表明MEV NS1具有誘導細胞凋亡的能力,而NS2、VP1和VP2不能誘導細胞凋亡。在上述研究的基礎上,進一步分析MEV NS1引起細胞凋亡的作用機制。利用Western blot、免疫熒光和流式細胞術分析MEV NS1對細胞內Caspase和凋亡相關蛋白的影響。發(fā)現NS1能激活Caspase-9和Caspase-3,而Caspase-8和Caspase-12沒有被活化;同時發(fā)現NS1能使Bax/Bcl-2比值升高,Bcl-2(Ser 70)磷酸化;促進Bax從胞漿中轉位進入線粒體,Cyt C線粒體釋放進入細胞質中誘導凋亡發(fā)生;NS1能降低線粒體膜電位、提高線粒體膜通透性并且導致細胞內ROS積累;NS1能抑制p38 MAPK和p53啟動子活性,還能導致p38 MAPK(Thr 180/Tyr 182)和p53(Ser 15)、p53(Ser 20)發(fā)生磷酸化;為了進一步揭示其作用機制,我們用p38 MAPK和p53特異性抑制劑預處理細胞,結果顯示NS1誘導細胞凋亡的能力顯著下降。綜合以上研究結果表明,MEV NS1通過線粒體介導的細胞凋亡途徑誘導凋亡,同時p38 MAPK和p53在NS1誘導細胞凋亡過程中起到重要的調節(jié)作用。
【學位授予單位】：中國農業(yè)科學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S852.65
【圖文】：

圖 1-1 細小病毒 DNA 基因組結構 (Carter and Saunders, 2007; Kerr et al., 2006; King et al., 201igure 1-1 Parvovirus genome structure (Carter and Saunders, 2007; Kerr et al., 2006; King et al., 20圖 1-2 CPV VP2 蛋白二級結構示意圖 (Xie; Chapman, 1996)-2 Location of secondary structural elements within the primary sequence of CPV VP2 (Xie; Chapm病毒在基因組結構上有一個顯著的特征是在 DNA 兩端含有回文結構形成的 B）。3 端的回文結構長約 200 nt，形成的 Y 型結構，5 端回文結構長約

CPVVP2蛋白二級結構示意圖(Xie;Chapman,1996)

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 鄧過房;;2016年諾貝爾生理或醫(yī)學獎背景下的細胞死亡方式再認識[J];中學生物學;2017年05期

2 寧旭;于忠鳴;;創(chuàng)造性的自主毀滅——細胞凋亡簡介[J];中學生物學;2006年10期

3 劉春秋;卞茂紅;;藥物致紅細胞凋亡的研究進展[J];臨床輸血與檢驗;2017年04期

4 劉晨;馮雪;;人CXCR4基因對胰腺癌SW1990細胞凋亡和細胞周期的影響[J];健康之路;2017年06期

5 王方;;過表達TIPE2上調BID分子促進H446細胞凋亡[J];科學中國人;2017年18期

6 賈寧;孫榮釗;;病毒感染對細胞凋亡的影響及作用機制[J];中國動物檢疫;2012年08期

7 趙君怡;劉偉國;郭秀麗;;一氧化氮與細胞凋亡相關疾病的關系及其調控[J];中國藥學雜志;2010年14期

8 黃小丹;;細胞凋亡與疾病[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2009年05期

9 陳藝娟;鄧甲興;林永利;;中藥影響細胞凋亡的研究進展[J];福建畜牧獸醫(yī);2008年01期

10 劉伍梅;汪銘書;程安春;周毅;劉芳;張平英;李雪梅;陳孝躍;;PRRSV感染Marc-145細胞凋亡的形態(tài)學觀察[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2008年03期

相關會議論文 前10條

1 李佑生;王文健;劉毅;何春燕;何燕銘;陳偉華;應健;;黃芪多糖丹酚酸對高糖誘導的足細胞凋亡的影響[A];中華中醫(yī)藥學會血栓病分會第四次學術研討會暨廣東省中醫(yī)藥學會血栓病專業(yè)委員會首屆學術研討會論文集[C];2010年

2 覃玉榮;張志勇;;細胞濃度變化對細胞凋亡率影響及其機理初探[A];全國電磁兼容學術會議論文集[C];2006年

3 于青;袁偉杰;姚建;;晚期糖基化終末產物引起足細胞凋亡的機制[A];2007年浙滬兩地腎臟病學術年會資料匯編[C];2007年

4 吳經緯;湯長發(fā);;運動中細胞凋亡的線粒體變化特征[A];湖南省生理科學會2006年度學術年會論文摘要匯編[C];2007年

5 蒲小平;李長齡;屠鵬飛;宋志宏;;中藥肉叢蓉成分抗神經細胞凋亡的實驗研究[A];第七屆全國生化藥理學術討論會論文摘要集[C];2000年

6 符必謙;奚勝艷;王彥暉;;中藥及復方促腫瘤細胞凋亡的作用及機制[A];第二屆臨床中藥學大會論文集[C];2018年

7 林其誰;;線粒體與細胞凋亡[A];第七屆全國生物膜學術討論會論文摘要匯編[C];1999年

8 邱潔;高海青;;鋅在細胞凋亡中的作用研究進展[A];山東省微量元素科學研究會第三屆學術研討會論文匯編[C];2006年

9 寧存德;;細胞凋亡與口腔疾病[A];FDI、CSA臨床口腔進展學術會議論文匯編[C];1999年

10 華子春;;靶向性誘導腫瘤細胞凋亡藥物研發(fā)[A];全國第十一屆生化與分子藥理學學術會議論文集[C];2009年

相關重要報紙文章 前10條

1 方方　曹雪琴;吳政星的挑戰(zhàn)與求索[N];科學時報;2011年

2 實習生 劉雨亭;細胞凋亡如何推進？以觸發(fā)波的“名義”[N];科技日報;2018年

3 ;“細胞凋亡療法”正逐步成為治療癌癥的新途徑[N];中國高新技術產業(yè)導報;2002年

4 記者 何德功;基因變異可能致癲癇[N];新華每日電訊;2004年

5 ;3’取代吲哚類衍生物誘導HL－60細胞凋亡的實驗研究[N];中國醫(yī)藥報;2003年

6 ;As_(2)S_(2)與STI571協同誘導K562細胞凋亡[N];中國醫(yī)藥報;2003年

7 董學清 吳延華;阿膠抑癌作用顯著[N];中國醫(yī)藥報;2003年

8 高書明;誘導癌細胞凋亡[N];中國醫(yī)藥報;2004年

9 楊堤林;中藥可誘導腫瘤細胞凋亡[N];中國中醫(yī)藥報;2004年

10 記者張建松;治療癌癥新途徑：細胞凋亡療法[N];科技日報;2002年

相關博士學位論文 前10條

1 林鵬;水貂腸炎病毒NS1非結構蛋白調控細胞凋亡的分子機制[D];中國農業(yè)科學院;2019年

2 李玉明;豬繁殖與呼吸綜合征病毒誘導bystander細胞凋亡機制研究[D];中國農業(yè)科學院;2017年

3 魏薇;我國優(yōu)勢基因型弓形蟲蟲株致密顆粒蛋白15誘導人絨毛膜細胞JEG-3凋亡的機制研究[D];安徽醫(yī)科大學;2018年

4 徐祥;Nupr1及C/EBPβ在甲基苯丙胺誘導的神經毒性中的作用[D];南方醫(yī)科大學;2018年

5 沈雯;循環(huán)miRNA參與吸煙所致COPD的作用及機制研究[D];昆明醫(yī)科大學;2018年

6 朱思遠;晚期氧化蛋白產物誘導成骨細胞凋亡的機制研究[D];南方醫(yī)科大學;2018年

7 鄭旭;白藜蘆醇對甲狀腺癌防治作用的實驗研究[D];大連醫(yī)科大學;2018年

8 柏素云;新型吡唑香豆素衍生物和二茂鐵吡唑衍生物對細胞凋亡、自噬和細胞周期的調節(jié)及機制研究[D];山東大學;2015年

9 陳玲;游離脂肪酸對人臍靜脈內皮細胞炎癥反應的影響及作用機制[D];山東大學;2018年

10 張玉柱;丙泊酚預處理對肝臟缺血再灌注損傷的作用及機制研究[D];山東大學;2018年

相關碩士學位論文 前10條

1 孫曉宇;甲基苯丙胺通過降低Melusin蛋白引起心肌損傷和細胞凋亡的研究[D];貴州醫(yī)科大學;2019年

2 黃銀亮;線粒體靶向的比率型雙光子熒光探針對細胞凋亡的可視化研究[D];安徽大學;2019年

3 范崢;TGF-β/SMAD信號通路在雙酚A誘導細胞凋亡中的作用[D];沈陽醫(yī)學院;2019年

4 孫浩玉;凋亡基因RTN3在紅系發(fā)育過程中的功能研究[D];鄭州大學;2019年

5 陳美華;JQ1增敏阿霉素誘導細胞凋亡機理研究[D];廈門大學;2018年

6 李蕓達;金合歡素拮抗溶血卵磷脂誘導大鼠血管平滑肌細胞凋亡的分子機制研究[D];廈門大學;2018年

7 李明達;免疫共沉淀聯合質譜鑒定DAI相互作用蛋白[D];廈門大學;2018年

8 徐洋;鴨瘟病毒US5基因抑制雙氧水誘導的細胞凋亡的初步研究[D];四川農業(yè)大學;2017年

9 王小燕;Rap2b通過與線粒體蛋白相互作用調節(jié)細胞凋亡的研究[D];揚州大學;2018年

10 黃日鎮(zhèn);香豆素哌嗪衍生物的合成及其抗腫瘤活性研究[D];廣西師范大學;2015年

本文編號：2740331