本文關鍵詞：水貂阿留申病ELISA抗體檢測試劑盒的研制及水貂阿留申病血清學調查，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：水貂阿留申病(Aleutian disease of mink,MAD)是慢性、消耗性傳染病。是由水貂阿留申病毒[1](Aleutian mink disease parvovirus,AMDV)引起,該病毒具有自主復制能力,能使水貂的免疫細胞遭到侵害從而導致全身免疫系統(tǒng)功能紊亂。該病幾乎遍布于世界各養(yǎng)貂國家,在我國某些貂群中血清陽性率可達50%~90%,各個年齡段水貂都易感,該病已成為水貂的重要傳染病之一。目前我國使用的水貂阿留申病鑒定方法主是CIEP(Convection immunoelectrophoresis:對流免疫電泳),該方法檢測成本較高,每次檢測樣品的數(shù)量也比較少,不方便進行大批量檢測,并且多用于實驗室檢測。因此研發(fā)更高效、低廉的檢測試劑盒,對貂場的凈化以及該病的防控具有重要意義。本研究將反應原性和特異性鑒定良好的人工設計抗原肽段(命名為sd)在大腸桿菌BL21中誘導表達,經(jīng)Niz+親和層析柱純化后再超濾濃縮,得到高純度、反應原性好的sd重組蛋白,濃度為12 mg/ml。按照實驗室已經(jīng)建立的水貂阿留申病ELISA抗體檢測方法,將此sd重組蛋白為包被抗原,組裝了水貂阿留申病ELISA抗體檢測試劑盒,并進行了試劑盒保存期、可重復性、特異性以及敏感性的評價。結果表明:試劑盒在-20℃條件下保存期為6個月,4℃條件下保存期為1個月。試劑盒能特異性的檢測水貂阿留申病陽性標準血清,與犬瘟熱病毒、水貂腸炎病毒、犬細小病毒、偽狂犬病毒等陽性標準血清均無交叉反應;用該試劑盒對水貂阿留申病標準陽性血清進行檢測并于CIEP法作比較,結果表明靈敏度高于CIEP方法;重復性試驗表明,試劑盒批內差異系數(shù)為0.667%~5.811%,批間差異為0.882%~6.046%,小于10%,說明試劑盒批間、批內可重復性好。用研制的ELISA試劑盒與CIEP檢測方法同時檢測實驗室所保存的379份水貂血清。結果顯示sd-ELISA試劑盒檢測方法檢出陽性率是:82.3%,而CIEP陽性檢出率為是:74.6%。用該方法對我國山東、大連、吉林、黑龍江、河南等主要養(yǎng)貂區(qū)域的2190份血清進行阿留申病血清學調查,各地感染率存在明顯差異,分別為:96.3%、82.1%、71.2%、64.2%、69.8%。實驗結果表明sd-ELISA試劑盒具有可重復性好,特異性強、靈敏度高等特點,其檢測效果與CIEP相比,價格低廉,可批量操作,能夠滿足我國水貂場、散養(yǎng)戶以及進出口檢驗檢疫的實際需要。
【關鍵詞】：水貂阿留申病病毒 ELISA試劑盒 抗體檢測 血清學調查
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S858.92
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮略詞表10-11
• 前言11-13
• 第一篇 文獻綜述13-27
• 第一章 水貂阿留申病的研究進展13-22
• 1.1 MAD的流行歷史及流行態(tài)勢14-16
• 1.2 MAD的流行病學16-19
• 1.3 MADV的概述19-22
• 第二章 水貂阿留申病的診斷方法22-27
• 2.1 對流免疫電泳（CIEP）22-23
• 2.2 血清電泳23
• 2.3 碘凝集試驗（IAT）23-24
• 2.4 淋巴細胞酯酶標記24
• 2.5 間接免疫熒光實驗（IIF）24
• 2.6 PPA-ELISA24
• 2.7 抗原檢測法24-25
• 2.8 補體結合試驗（CF）25
• 2.9 聚合酶鏈式反應（PCR）25-26
• 2.10 酶標斑點紙條26
• 2.11 火箭電泳26
• 2.12 免疫復合物（CIC）檢測26-27
• 第二篇 研究內容27-65
• 第一章 水貂阿留申病ELISA抗體檢測試劑盒的研制27-55
• 1.1 實驗材料28-33
• 1.2 主要實驗儀器及設備33
• 1.3 方法33-42
• 1.4 結果42-52
• 1.5 討論52-54
• 1.6 小結54-55
• 第二章 水貂阿留申病血清學調查55-65
• 2.1 材料56
• 2.2 方法56-58
• 2.3 結果與分析58-62
• 2.4 討論62-64
• 2.5 小結64-65
• 結論65-66
• 參考文獻66-73
• 導師簡介73-74
• 作者簡介74-75
• 致謝75

【參考文獻】

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  本文關鍵詞：水貂阿留申病ELISA抗體檢測試劑盒的研制及水貂阿留申病血清學調查，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：272601