【摘要】：畜禽炎癥嚴(yán)重威脅動物健康及養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì),探尋一種有效且低毒環(huán)保的治療畜禽炎癥的藥物具有重要意義。竹節(jié)參皂苷Ⅳa(Chikusetsu SaponinⅣa,CHS-Ⅳa)是一種母核為三萜類的糖苷類化合物,為竹節(jié)參中主要活性成分,其具有降血糖、降血脂、抗病毒等藥理活性。同時,CHS-Ⅳa還具有一定的抗炎效果,但其抗炎的分子機(jī)制還需進(jìn)一步探究。本試驗以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7建立體外炎癥模型,探究CHS-Ⅳa的抗炎效果及作用的分子機(jī)制。方法與結(jié)果如下:1.采用形態(tài)學(xué)觀察、MTT法檢測細(xì)胞活力、Q-PCR檢測細(xì)胞中IL-6的表達(dá)水平,確定LPS構(gòu)建炎癥模型的作用時間和濃度,結(jié)果顯示,0.1、1、5、10μg/mL的LPS刺激RAW264.7細(xì)胞6、12、24 h后,細(xì)胞活力較對照組無明顯變化,但LPS刺激24h后,細(xì)胞膜向外延展,呈現(xiàn)出梭形或多邊形,LPS濃度越高該變化越明顯,同時,細(xì)胞中IL-6 mRNA的相對表達(dá)較對照組也呈劑量依賴性地升高,綜合考慮,選擇建立炎癥模型的LPS濃度為1μg/mL,時間為24 h;2.采用MTT法檢測細(xì)胞活力,確定CHS-Ⅳa作用于RAW264.7細(xì)胞的安全濃度,我們發(fā)現(xiàn),25μg/mL的CHS-Ⅳa無論作用12 h,還是作用24 h都顯著降低了細(xì)胞活力,而3.125、6.25、12.5μg/mL的CHS-Ⅳa單獨處理細(xì)胞和預(yù)處理后加LPS刺激都對細(xì)胞活力無明顯影響,為作用RAW264.7細(xì)胞的安全濃度;3.ELISA檢測細(xì)胞上清IL-6、IL-1β、IL-10、TNF-α水平,Q-PCR檢測細(xì)胞中IL-6、IL-1β、IL-10、TNF-αmRNA的表達(dá),結(jié)果表明,CHS-Ⅳa能夠抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α等炎癥因子分泌以及mRNA的相對表達(dá);4.采用Western blot、Q-PCR、ELISA分別檢測CHS-Ⅳa對細(xì)胞中COX-2蛋白表達(dá)、COX-2和iNOS mRNA表達(dá)及細(xì)胞上清液中PGE2、NO釋放的影響,結(jié)果顯示,CHS-Ⅳa能夠抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞COX-2、iNOS的表達(dá)以及PGE2、NO的產(chǎn)生;5.Western blot檢測CHS-Ⅳa對LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞NF-κB信號通路中IκB-α和p65,MAPK通路中磷酸化蛋白p-p38、p-JNK、p-ERK以及JAK-STAT1通路中p-STAT1表達(dá)的影響,結(jié)果顯示,CHS-Ⅳa能夠升高IκB-α和p65總蛋白的表達(dá),抑制磷酸化蛋白p-p38、p-JNK、p-ERK以及p-STAT1的表達(dá)。綜上,CHS-Ⅳa可能通過抑制NF-κB、MAPK和STAT1的活化降低炎癥基因的表達(dá)及炎性因子的分泌,從而達(dá)到抗炎的效果。
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S853.74

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2718053