發(fā)布時(shí)間：2020-06-17 17:25

【摘要】：沙門(mén)菌(Salmonella)是全球范圍內(nèi)常見(jiàn)的食源性致病菌,可廣泛感染哺乳類、鳥(niǎo)類、爬行動(dòng)物、兩棲動(dòng)物等。人類可由多種途徑感染,其中通過(guò)畜禽產(chǎn)品是最主要的感染途徑。沙門(mén)菌分型復(fù)雜,目前僅根據(jù)血清型方法可初步分為近2600種血清型,但由于分型血清價(jià)格較高、影響分型試驗(yàn)的因素多,其應(yīng)用于揭示病原菌之間關(guān)系時(shí)存在較大缺陷。隨著分子生物學(xué)發(fā)展,將血清分型與分子分型相結(jié)合可極大提高對(duì)沙門(mén)菌分型的準(zhǔn)確性。隨著抗菌藥物的應(yīng)用,在抗生素的選擇壓力下,沙門(mén)菌耐藥菌株不斷增多,超級(jí)耐藥菌株的發(fā)現(xiàn)更給公共衛(wèi)生提出了新的挑戰(zhàn)。本文研究了我國(guó)1950～2009年間60株動(dòng)物源沙門(mén)菌分離株的血清型、MLST分型分布情況,并對(duì)樣品進(jìn)行了耐藥性檢測(cè)和致病性研究,建立了相應(yīng)的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)庫(kù),為沙門(mén)菌的檢測(cè)、追蹤溯源和防控提供基本信息。(1)本研究中60株動(dòng)物源沙門(mén)菌,其中雞源分離株33株(55%),豬源分離株25株(41.67%),馬源分離株2株(3.33%);血清型分型共分為7個(gè)血清型,其中豬霍亂沙門(mén)菌(Salmonella choleraesuis)、腸炎沙門(mén)菌(Salmonella Enteritidis)和雞白痢沙門(mén)菌(SalmonellaPullorum)三種血清型分離率位于前三位,分別占總菌株數(shù)的31.67%(19/60)、26.67%(16/60)和21.67%(13/60),其余鼠傷寒沙門(mén)菌(Salmonella Typhimurium)、馬流產(chǎn)沙門(mén)菌(Salmonella Abortusequi)、田納西沙門(mén)菌(Salmonella Tennessensis)和印第安納沙門(mén)菌(Salmonella Indiana)分別為 10%(6/60)、3.33%(2/60)、3.33%(2/60)和 3.33%(2/60)。血清型具有明顯的時(shí)代特征,1950-1969年豬作為畜牧業(yè)中主要的養(yǎng)殖動(dòng)物所受重視程度較高,分離的沙門(mén)菌血清型以豬霍亂沙門(mén)菌為主(12/20),而鼠傷寒沙門(mén)菌(2/20)、雞白痢沙門(mén)菌(4/20)和腸炎沙門(mén)菌(2/20)均有分離;1970-1989年分離的沙門(mén)菌血清型豬霍亂沙門(mén)菌(7/20)與雞白痢沙門(mén)菌(7/20)比例相同,除鼠傷寒沙門(mén)菌(4/20)外,還分離到了馬流產(chǎn)沙門(mén)菌(2/20);1990-2009年我國(guó)畜禽養(yǎng)殖出現(xiàn)了集約化養(yǎng)殖的趨勢(shì),分離的沙門(mén)菌絕大多數(shù)是禽源沙門(mén)菌,血清型主要是腸炎沙門(mén)菌(14/20),此外還分離到田納西沙門(mén)菌(2/20)和印第安納沙門(mén)菌(2/20)。MLST分型共有9個(gè)ST型,ST68、ST11、ST92所占比例較高,分別為30%(18/60),26.67%(16/60)和15%(9/60),其余各菌株ST 型所占比例為 ST19:10%(6/60)、ST132:6.67%(4/60)、ST17、ST251和 ST319 均為3.33%(2/60)、ST139:1.67%(1/60)。MLST分型結(jié)果與血清型分型結(jié)果對(duì)應(yīng)性良好,ST11為腸炎沙門(mén)菌、ST17為印弟安那沙門(mén)菌、ST92和ST132為雞白痢沙門(mén)菌、ST319為田納西沙門(mén)菌、ST68和ST139為豬霍亂沙門(mén)菌、ST19為鼠傷寒沙門(mén)菌、ST251為馬流產(chǎn)沙門(mén)菌。此外試驗(yàn)結(jié)果顯示MLST分型能力要略高于血清學(xué)分型方法,可以一定程度的區(qū)分分離株,在同一血清型內(nèi)不同分離株間進(jìn)一步分析其系統(tǒng)進(jìn)化和親緣關(guān)系。(2)本研究中沙門(mén)菌樣本對(duì)氨芐西林(AM)、多西環(huán)素(DOX)、四環(huán)素(TE)和磺胺異惡唑(SF)藥敏試驗(yàn)結(jié)果呈現(xiàn)雙峰式分布,耐藥菌株與敏感菌株MIC分布相對(duì)集中;超過(guò)30%的菌株對(duì)多黏菌素(CL)低敏,所有菌株對(duì)美羅培南(MEM)高敏。由于阿莫西林/克拉維酸(A/C)、慶大霉素(GM)、大觀霉素(SPF)、氧氟沙星(OFL)、恩諾沙星(ENR)和復(fù)方新諾明(SXT)這6種抗生素的抑菌效果較好,其耐藥菌株比例均小于5%,頭孢噻呋(CEF)、氟苯尼考(FFC)和頭孢他啶(CAZ)的抑菌效果稍弱,分別有11.67%、8.33%和6.67%的菌株對(duì)其耐藥。按照菌株分離時(shí)間統(tǒng)計(jì),1950-1959年間分離的沙門(mén)菌對(duì)藥物敏感性很高,僅有1株細(xì)菌對(duì)DOX處于中介值,其余菌株對(duì)15種抗生素均敏感;1960-1969年間菌株對(duì)CAZ、GM、SPF和CL敏感的菌株有所減少,有4株菌株對(duì)SPF處于中介值,有2株分離株對(duì)CL耐藥;1970-1989年間分離的沙門(mén)菌對(duì)DOX、GM、SPF和CL均有耐藥菌株的產(chǎn)生,總體上處于中介值以上的菌株數(shù)量上與60年代差別不大;1990-1999年間,沙門(mén)菌耐藥性突然增強(qiáng),超過(guò)50%的菌株對(duì)AM、TE、SF和CL產(chǎn)生了耐藥性,60%的菌株對(duì)ENR的藥敏性處于中介值;2000-2009年間分離的沙門(mén)菌株中,超過(guò)了 50%的菌株對(duì)AM、SF、TE、DOX、CL和CEF產(chǎn)生耐藥性,并且對(duì)除美羅培南外的14種抗生素均有耐藥菌株的產(chǎn)生。本研究中有23株沙門(mén)菌對(duì)抗生素耐藥,其中5株沙門(mén)菌僅對(duì)1種抗生素產(chǎn)生耐藥性;18株沙門(mén)菌對(duì)2種及以上抗生素產(chǎn)生耐藥性;4重、5重耐藥菌株所占比例較大,分別有9株(50%)、6株(33.33%)。對(duì)抗生素耐藥譜分析共有12個(gè)耐藥譜,其中AM-TE-DOX-SF為主導(dǎo)耐藥譜,所占比例為22.22%,50%的沙門(mén)菌僅有1種耐藥譜。根據(jù)菌株分離時(shí)間分析其耐藥譜,1990年代主導(dǎo)耐藥譜為AM-TE-SF-CL和AM-TE-DOX-SF,2000年代主導(dǎo)耐藥譜為AM-TE-DOX-SF-CL,其次為AM-TE-DOX-SF。綜合分析各耐藥譜發(fā)現(xiàn),共有12株沙門(mén)菌含有AM-TE-SF耐藥組合,占所有多重耐藥菌株的66.67%,該組合應(yīng)已成為一個(gè)固定耐藥譜。本研究針對(duì)磺胺類、β-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、氯霉素類、四環(huán)素類和喹諾酮類的耐藥基因分別應(yīng)用14對(duì)引物進(jìn)行檢測(cè),其中sul2、blaTEM和tet(A)等3種耐藥基因檢出量較高,分別占被檢樣品的76.19%、71.43%和61.90%,aac(6)-1b和floR占23.81%,aacC4和t t(G)占 19.05%,blaOX4 占 14.29%,blaCMY、blaPSE、blaSHV、catA1、qnrA 和qnrB等6種基因未被檢出,耐11種以上的兩種耐藥菌均檢出攜帶有blaOXA、aacC4、aac(6)-1b、floR和tet(A),此基因組合可能是其成為超級(jí)耐藥克隆的主要原因。(3)本研究中選用ICR小鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,建立統(tǒng)一的動(dòng)物模型,可快速對(duì)不同動(dòng)物源的沙門(mén)菌致病性進(jìn)行比對(duì)。根據(jù)研究結(jié)果,60株沙門(mén)菌對(duì)ICR小鼠ID50的致病菌量主要集中于107CFU,占總菌株的41.67%,1960-1989年分離菌株ID50致病菌量集中在108CFU,占該時(shí)間段分離菌株的50%,2000-2009年間分離的沙門(mén)菌毒力最強(qiáng),ID50中位數(shù)為1.41×107,1960-1969年分離的沙門(mén)菌毒力最弱,中位數(shù)為12.28×107,比較各年代沙門(mén)菌菌株間標(biāo)準(zhǔn)差發(fā)現(xiàn)其波動(dòng)幅度較大,表明不同年代菌株間致病性差異明顯。研究不同血清型沙門(mén)菌的致病性發(fā)現(xiàn),印第安納沙門(mén)菌致病最強(qiáng),ID50為106CFU,其次為鼠傷寒沙門(mén)菌和腸炎沙門(mén)菌,ID50為107CFU,豬霍亂沙門(mén)菌、雞白痢沙門(mén)菌、馬流產(chǎn)沙門(mén)菌和田納西沙門(mén)菌ID50為108CFU。相同血清型不同菌株比較,鼠傷寒沙門(mén)菌、腸炎沙門(mén)菌、田納西沙門(mén)菌和印第安納沙門(mén)菌各菌株ID50相近,豬霍亂沙門(mén)菌、雞白痢沙門(mén)菌和馬流產(chǎn)沙門(mén)菌差異顯著;分析沙門(mén)菌ST型與致病性關(guān)系,ST139致病性最強(qiáng),ID50為4.4×106 CFU,其次為 ST17 菌株,ID50 菌量為 9×106CFU,ST19、ST11 和 ST92 菌株.ID50 菌量為 107CFU,ST68、ST132、ST251 和 ST319 的 ID50 菌量為 108CFU。比較各 ST 型菌株致病性標(biāo)準(zhǔn)差,ST19、ST11、ST132、ST17和ST319 5種ST型菌株標(biāo)準(zhǔn)差均小于5,菌株間致病性差異不顯著,ST68、ST92和ST251標(biāo)準(zhǔn)差約等于10,差異顯著。以上結(jié)果表明致病性與血清型/ST型存在相互對(duì)應(yīng)關(guān)系,血清型/ST型不同,致病性也有差異,同型菌株間的差異程度與致病性強(qiáng)弱無(wú)關(guān),僅與型特異性相關(guān)。本研究中共22株沙門(mén)菌具有耐藥性,其中1株超級(jí)耐藥菌(耐藥種類12種)致病性最強(qiáng),ID50為7×105CFU,其他多重耐藥菌株(耐藥種類2)ID50的Med均在107 CFU,1株雙重耐藥的菌株ID50為1.2×109 CFU,其余僅對(duì)一種抗生素有耐藥的菌株的ID50為108CFU�；诒狙芯�,我們推斷沙門(mén)菌耐藥性增強(qiáng)能夠促進(jìn)其致病性。結(jié)論:(1)研究中60株動(dòng)物源致病性沙門(mén)菌共有7個(gè)血清型9個(gè)ST型,血清學(xué)分型結(jié)果與MLST分型結(jié)果進(jìn)行對(duì)應(yīng)比較,大多ST型均可與血清型有比較固定的對(duì)應(yīng)關(guān)系,沙門(mén)菌分型結(jié)果與分離年代有明顯相關(guān)性。(2)樣本中對(duì)AM、TE、DOX、SF和CL等五種抗生素產(chǎn)生耐藥性的菌株分離率較高,形成一個(gè)AM-TE-SF耐藥譜(分離率為66.67%)。耐藥基因檢測(cè)方面,blaTEM、sul2和tet(A)等3種耐藥基因檢出量較高。(3)沙門(mén)菌致病性為型特異性特征,僅與沙門(mén)菌的血清型/ST型相關(guān)。耐藥性與致病性關(guān)系有待進(jìn)一步研究證實(shí)。
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S852.61
【圖文】：

３．１．砂內(nèi)酰胺類藥物藥敏試驗(yàn)結(jié)果逡逑通過(guò)藥物敏感性試驗(yàn)分析各年份沙門(mén)菌對(duì)斤內(nèi)酰胺類藥物的藥敏性，１９５０－２００９年間分逡逑離的沙門(mén)菌對(duì)美羅培南敏感性最高（圖２．５），全部菌株均敏感無(wú)耐藥菌株產(chǎn)生．其次為阿莫逡逑西林／克拉維酸（圖２．２），產(chǎn)生了邋３株耐藥菌株和１株中介菌株；頭孢噻呋和頭孢他啶的藥逡逑敏性相對(duì)較低（圖２．３、２．４），分別有７株和６株耐藥菌產(chǎn)生；敏感性最低的是氨芐西林（圖逡逑２．１），３０％的菌株均對(duì)其有耐藥性。分析各年份菌株對(duì)藥物的敏感結(jié)果發(fā)現(xiàn)，耐藥菌株均逡逑出現(xiàn)在１９９０－２００９年間，且動(dòng)物源沙門(mén)菌對(duì)第三代頭孢類藥物的耐藥性產(chǎn)生極為迅速，逡逑１９８０－８９年間分離菌株對(duì)第三代頭孢藥物尚無(wú)耐藥性，１９９０－９９年間分離株對(duì)第三代頭孢藥逡逑物己有１０－２０％的菌株具有了耐藥性，而到了邋２０００－０９年，５０％的分離株均對(duì)第三代頭孢藥逡逑物產(chǎn)生了耐藥性，與１９９０ｓ相比增長(zhǎng)了邋３０個(gè)百分點(diǎn)。逡逑１２邋．逡逑：邐＇Ｉ邋Ｉ邐＂１逡逑Ｉ８邐W邋Ｕ逡逑Ｊ邐｜邐Ｉ邋Ｉ邋Ｉ邋Ｉ逡逑W逡逑Ｓ邋Ｉ邋Ｒ邐Ｓ邋Ｉ邋Ｒ邐Ｓ邋Ｉ邋Ｒ邐Ｓ邋Ｉ邋？邐Ｓ邋Ｉ邋Ｒ邐Ｓ邋！邋Ｒ逡逑１９５０－１９５９邐１９６０－１９６９邐１９７０－１９７９邐１９８

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【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2717916