【摘要】：目的:LPS作為G~-菌的重要致病因子之一,常常引起動(dòng)物疾病的發(fā)生,目前已在哺乳動(dòng)物方面有大量研究,能導(dǎo)致動(dòng)物急性肺損傷以及肝、腎等組織功能障礙進(jìn)而引起內(nèi)毒素血癥造成動(dòng)物死亡;但在禽類的研究少有報(bào)道且主要圍繞引起動(dòng)物體溫變化及局部組織病變和炎性因子的影響。而導(dǎo)致禽類致炎甚至死亡的研究報(bào)道就更少,是禽類對(duì)LPS的耐受,還是不敏感?為此本試驗(yàn)嘗試建立LPS致雛雞的炎癥模型,探究LPS對(duì)禽類的致病性及致炎條件。方法:取1日齡肉公雛180只,分為空白對(duì)照組(K)、LPS組(L)、血凝酶組(N)、血凝酶+LPS組(N+L),每組15只并設(shè)3個(gè)重復(fù)。K組腹腔注射無菌生理鹽水;N組頸靜脈注射250 U·kg~(-1)血凝酶;L組腹腔注射10 mg·kg~-11 LPS;N+L組頸靜脈注射250U·kg~(-1)血凝酶15 min后腹腔注射10 mg·kg~-11 LPS,0.2 mL/只。實(shí)時(shí)觀察注射后24h內(nèi)各組雛雞的臨床癥狀;分別測(cè)量0、1、3、6、12、24 h的直腸溫度;于24 h后收集血液作白細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞因子(TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、IL-8、NO)檢測(cè);頸部放血處死后觀察雛雞解剖病理變化,同時(shí)取心、肝、脾、肺、腎組織固定制作病理切片觀察病理學(xué)變化,綜合評(píng)價(jià)炎癥模型。并應(yīng)用市售抗炎藥地塞米松對(duì)動(dòng)物模型進(jìn)行治療,從臨床癥狀和組織病變等指標(biāo)進(jìn)行療效評(píng)價(jià)。結(jié)果:24 h內(nèi)K、N組雛雞狀態(tài)無明顯變化;L組部分雛雞在6 h內(nèi)飲食下降、精神沉郁等,6h后恢復(fù)正常;N+L組雛雞在12 h內(nèi)飲食明顯下降甚至無飲食欲,精神沉郁、扎堆、嗜睡等,24 h內(nèi)有20%左右雛雞死亡,剖解變化主要是腹腔有大量紅黑色組織液滲出。24 h內(nèi)K、N組雛雞溫度維持平衡,L、N+L組于注射后1 h溫度下降,3 h上升達(dá)最大值后逐漸下降至正常。白細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示K組顯著高于N、L、N+L組(P0.05)。ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示,N、L、N+L組雛雞分泌的TNF-α、IL-6、IL-8含量均極顯著高于K組(P0.01);N、N+L組雛雞分泌的IL-1β含量顯著或極顯著高于K組(P0.05,P0.01),L與K組差異不顯著(P0.05);L、N+L組雛雞分泌的NO含量極顯著高于K組(P0.01),N組含量低于K組且無顯著性差異(P0.05)。剖解結(jié)果顯示N+L組雛雞的肝臟及部分其他組織呈明顯出血現(xiàn)象,其他組未見異常。HE染色結(jié)果顯示:N+L組雛雞的心、肝、脾、肺、腎組織間均可見明顯血細(xì)胞增多且有溶血現(xiàn)象,組織內(nèi)有少量滲出物浸潤(rùn)。模型應(yīng)用結(jié)果顯示:注射后24 h內(nèi)與K組相比M組出現(xiàn)了明顯臨床癥狀,72 h炎性因子含量增加,剖解見腹腔及肝臟等的出血癥狀;而Y組較M組均有好轉(zhuǎn)。結(jié)論:用LPS單獨(dú)刺激雛雞未能建立理想的炎癥感染模型,但在血凝酶的輔助下刺激雛雞可獲得重復(fù)性較好的病理模型,用陽性藥地塞米松治療模型顯示癥狀有所改善,提示血凝酶在雛雞炎癥方面具有重要作用,但LPS和血凝酶對(duì)雛雞的具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究和驗(yàn)證。
【學(xué)位授予單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S858.31
【圖文】：

組別 TNF-α IL-1β IL-6 IL-8 NOK 118.71±1.04 846.39±29.20 24.48±0.85 108.18±3.24 24.14±0.92N 258.40±11.61**1080.88±44.51*105.71±3.38**382.80±13.58**17.37±0.87L 158.14±3.77**918.60±16.66 94.55±0.83**405.42±1.97**88.38±0.75**N+L 205.63±4.44**1565.81±0.98**112.49±1.29**427.37±3.94**136.82±1.86**3.3.5.1 血漿 TNF-α檢測(cè)結(jié)果將 0，5，10，20，40，80 pg·mL-1雞 TNF-α標(biāo)準(zhǔn)溶液的檢測(cè)結(jié)果以標(biāo)準(zhǔn)物濃度為橫坐標(biāo)，測(cè)得的吸光值△OD 為縱坐標(biāo)，制作雞炎癥因子 TNF-α標(biāo)準(zhǔn)曲線（見圖 9A），得到直線回歸方程：y=0.0116x+0.0234，R2=0.9968。由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算雞血漿中炎性因子 TNF-α含量，結(jié)果顯示：與 K 組相比，N、L、N+L 組雛雞分泌的 TNF-α含量均極顯著升高（P<0.01），但 N 組分泌量顯著高于 L、N+L組（P<0.05），見圖 9 B。AB

貴州大學(xué) 2019 屆專業(yè)碩士研究生學(xué)位論文3.3.5.2 血漿 IL-1β檢測(cè)結(jié)果將 0，40，80，160，320，640 pg·mL-1雞 IL-1β標(biāo)準(zhǔn)溶液的檢測(cè)結(jié)果以標(biāo)準(zhǔn)物濃度為橫坐標(biāo)，測(cè)得的吸光值△OD 為縱坐標(biāo)，制作雞炎癥因子 IL-1β標(biāo)準(zhǔn)曲線（見圖 10A），得到直線回歸方程：y=0.002x+0.0706，R2=0.9941。由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算雞血漿中炎性因子 IL-1β含量，結(jié)果顯示：與 K 組相比，N 組雛雞分泌的IL-1β顯著升高（P<0.05），N+L 組分泌量極顯著升高（P<0.01），L 組無顯著性差異（P>0.05），見圖 10 B。AB

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本文編號(hào)：2714413