【摘要】：抗菌肽(Antimicrobial peptides,AMPs)作為抗生素的新型替代物,具有抗多種病原性微生物,提高家畜生產(chǎn)性能,提高養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益等作用。目前已廣泛應(yīng)用于豬、雞養(yǎng)殖中。在集約化養(yǎng)殖中,反芻動(dòng)物易受病原微生物侵襲,從而導(dǎo)致瘤胃微生物區(qū)系改變,生產(chǎn)性能下降,上述情況受到飼料添加劑的調(diào)控。本研究旨在探究新型飼料添加劑AMPs——蜜蜂肽的抑菌效果,及其對(duì)育肥湖羊生產(chǎn)性能和瘤胃微生物區(qū)系的影響,為蜜蜂肽作為反芻動(dòng)物飼料添加劑應(yīng)用于育肥綿羊提供參考。試驗(yàn)一體外法研究蜜蜂肽對(duì)瘤胃微生物的影響本試驗(yàn)所用蜜蜂肽由甘肅奧林貝爾生物科技集團(tuán)有限公司提供,大腸桿菌ATCC10003和沙門(mén)氏菌ATCC10467均購(gòu)自中國(guó)工業(yè)微生物菌種保存中心,通過(guò)藥敏試驗(yàn)確定蜜蜂肽對(duì)大腸桿菌(E.coli)和沙門(mén)氏菌(salmonella)的最小抑菌濃度和最低抑菌效價(jià);體外發(fā)酵試驗(yàn)采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì),共3個(gè)處理,分別添加0、0.75 mg、1.5 mg蜜蜂肽,每個(gè)處理7個(gè)重復(fù)。在試驗(yàn)前,在每個(gè)玻璃發(fā)酵瓶?jī)?nèi)準(zhǔn)確稱取1 g飼糧,進(jìn)行體外發(fā)酵,發(fā)酵24 h冰水終止發(fā)酵,收集產(chǎn)氣和發(fā)酵液,測(cè)定瘤胃發(fā)酵液pH,確定蜜蜂肽對(duì)發(fā)酵液氣體產(chǎn)量、揮發(fā)性脂肪酸濃度以及部分微生物的影響。試驗(yàn)結(jié)果:蜜蜂肽對(duì)于E.coli、salmonella的最小抑菌濃度均為0.625 g/mL,最低抗菌效價(jià)均為533.33 AU/mL。體外發(fā)酵24 h,0.75 mg的蜜蜂肽能顯著提高瘤胃內(nèi)乙酸的濃度和乙酸丙酸比(P0.05),顯著降低丙酸濃度(P0.05),提高CH_4產(chǎn)量(P0.05),有提高普雷沃氏菌含量的趨勢(shì)(P=0.078)。試驗(yàn)二蜜蜂肽對(duì)育肥湖羊生產(chǎn)性能和瘤胃微生物區(qū)系的影響選擇2月齡斷奶、體重在25-30 kg的湖羊公羔180只。試驗(yàn)采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì),共5個(gè)處理,30個(gè)試驗(yàn)欄位,每個(gè)處理6個(gè)欄位,每欄飼養(yǎng)6只羊。蜜蜂肽配合飼料時(shí)以預(yù)混料形式添加到日糧處理,分別為對(duì)照組(無(wú)抗生素及蜜蜂肽添加日糧)、100 g/T組(基礎(chǔ)日糧+100 g/T蜜蜂肽)、200 g/T組(基礎(chǔ)日糧+200g/T蜜蜂肽)、400 g/T組(基礎(chǔ)日糧+400 g/T蜜蜂肽)、800 g/T(基礎(chǔ)日糧+800g/T蜜蜂肽)。試驗(yàn)過(guò)渡期14 d、預(yù)飼期14 d,正試期63 d。試驗(yàn)結(jié)果如下:1.湖羊飼喂蜜蜂肽顯著增加全期平均日增重(Average daily gain,ADG)(P0.05)。全期的體重隨飼料中蜜蜂肽添加量的提高,呈顯著線性增加(P0.05);平均日采食量(Average daily feed intake,ADFI)隨飼料中蜜蜂肽添加量的提高,呈顯著線性增加(P0.05);料重比與飼料中蜜蜂肽含量,呈顯著線性負(fù)相關(guān)(P0.05)。2.飼料中添加蜜蜂肽能顯著提高瘤胃中反芻獸新月形單胞菌和產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌的數(shù)量,隨蜜蜂肽濃度的增加,兩種菌數(shù)量均呈先降低后增加的二次變化(P0.05),普雷沃氏菌的數(shù)量變化顯著(P0.05),且隨蜜蜂肽濃度的增加,該菌數(shù)量呈先增加后降低的二次變化趨勢(shì),嗜淀粉瘤胃桿菌的數(shù)量和內(nèi)厚壁菌門(mén)的豐度呈顯著線性增加(P0.05)。添加蜜蜂肽顯著提高無(wú)壁菌門(mén)的豐度,而且隨飼料中蜜蜂肽含量的提高,該菌豐度呈現(xiàn)降低后增加的變化。飼料中的蜜蜂肽能顯著提高瘤胃內(nèi)乙酸比例和降低丙酸比例(P0.05),且隨蜜蜂肽含量的增加,比例均呈先增加后降低的二次變化;能顯著降低瘤胃內(nèi)異丁酸的比例(P0.05),隨蜜蜂肽含量的增加,異丁酸呈先降低后增加的二次變化;還能顯著提高瘤胃內(nèi)乙丙比(P0.05),乙丙比隨蜜蜂肽濃度的提高呈先增加后降低的二次變化。綜上所述,蜜蜂肽能特異性抑制革蘭氏陰性菌大腸桿菌和沙門(mén)氏菌,還可以提高乙酸比例,降低丙酸比例,提高乙丙比,促進(jìn)瘤胃乙酸型發(fā)酵;給育肥湖羊飼喂添加有蜜蜂肽的飼料,能夠提高育肥湖羊的生產(chǎn)性能,調(diào)節(jié)其瘤胃微生物區(qū)系和瘤胃發(fā)酵。
【圖文】：

沙門(mén)氏菌的劃線培養(yǎng)結(jié)果

13圖 2-2 大腸桿菌劃線培養(yǎng)結(jié)果Fig.2-2 Marking and culturing results of E.coli配置 LB 液體培養(yǎng)基 30 mL，121℃高壓滅菌 15 min 后，分裝在 10 mL 試管中。用牙簽蘸取單菌落，丟入試管中，，37℃、225 r/min 搖菌 8 h。配置 LB 液體培養(yǎng)基 100 mL，121℃高壓滅菌 15 min，取 1 mL 菌液加入到LB 液體培養(yǎng)基中，37℃、225 r/min 搖菌 15 h。將加熱融化的 LB 固體培養(yǎng)基 15mL 注入到無(wú)菌平皿中，待其凝固后于表面放置內(nèi)徑 6 mm，外徑 7.8 mm 的牛津杯，分別吸取活化好的 E.coli 和 Salmonella
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S826.5

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本文編號(hào)：2704939