發(fā)布時(shí)間：2020-06-08 03:15

【摘要】：巖羊(Pseudois nayaur)是賀蘭山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)內(nèi)分布最為廣泛的小反芻獸類,在我國(guó)被列為二級(jí)重點(diǎn)保護(hù)野生動(dòng)物。寄生蟲(chóng)病往往會(huì)給野生動(dòng)物的健康帶來(lái)較大的危害。而目前對(duì)于野生巖羊寄生蟲(chóng)病的研究,國(guó)內(nèi)鮮有報(bào)道。本研究中,對(duì)于救護(hù)失敗的幼齡巖羊,主要是對(duì)毛尾線蟲(chóng)病的病原進(jìn)行鑒定及遺傳進(jìn)化分析。對(duì)于因種群管理而捕獲的巖羊,研究工作主要針對(duì)的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(chóng),進(jìn)行群體遺傳學(xué)的相關(guān)研究。因?yàn)槟磙D(zhuǎn)血矛線蟲(chóng)在中國(guó)小反芻獸類中是一種較為常見(jiàn)的病原體,有較強(qiáng)的致病性。本實(shí)驗(yàn)中,我們從救護(hù)失敗的幼齡巖羊盲腸中發(fā)現(xiàn)四條毛尾線蟲(chóng),根據(jù)尾部形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)的差異,初步鑒定為兩種(T skrjabini和Trichuris.sp)。為了更準(zhǔn)確的鑒定,我們利用巢式PCR方法的擴(kuò)增了這四條毛尾線蟲(chóng)的18S-ITS1-5.8S的片段基因,進(jìn)行分子學(xué)鑒定以及遺傳進(jìn)化分析�；蛐蛄斜葘�(duì)發(fā)現(xiàn),依據(jù)形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)分成的兩種毛尾線蟲(chóng),無(wú)論是種間還是種內(nèi)18S序列及5.8S序列較為保守;ITS1序列的種間差異較大,范圍在10.69%～11.29%之間,而種內(nèi)的ITS1序列的差異較小,僅為0.20%～1.06%。對(duì)這四條毛尾線蟲(chóng)進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析,與形態(tài)學(xué)的鑒定結(jié)果一致,這四條毛尾線蟲(chóng)在進(jìn)化樹(shù)上分為獨(dú)立的兩個(gè)進(jìn)化枝。其中一種與T.skrjabini構(gòu)成姐妹類群(Clad A)。因此感染此幼齡巖羊的毛尾線蟲(chóng)其中一種為T.skrjabini(Clad B)。另外一種巖羊毛尾線蟲(chóng)在進(jìn)化樹(shù)上與來(lái)自黑山羊的毛尾線蟲(chóng)聚集在一起。因此,在賀蘭山分布的野生巖羊受到來(lái)自兩種不同的毛尾線蟲(chóng)病原的威脅。本實(shí)驗(yàn)中,我們從因種群管理而捕獲的5只老弱病殘巖羊體內(nèi)分離得到57條捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(chóng),又從巖羊自然棲息地的附件的一個(gè)山村(第七農(nóng)場(chǎng)大隊(duì))內(nèi)的家養(yǎng)綿羊內(nèi)采集到20條捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(chóng)。通過(guò)PCR方法,擴(kuò)增得到這77條捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(chóng)的ITS2全序列。序列分析表明這77條蟲(chóng)均屬于捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(chóng),且共有10個(gè)基因類型。其中GT1、2以及3為主要的ITS2基因類型,巖羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(chóng)和綿羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(chóng)的ITS2核苷酸多樣性分別為0.008和0.004。通過(guò)PCR方法,擴(kuò)增出這77條捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(chóng)的nadh4基因片段進(jìn)行種群遺傳分析,其中有73個(gè)單倍型,55個(gè)來(lái)自巖羊,18個(gè)來(lái)自綿羊,單倍型多樣性分別為0.999和0.995。此外又從數(shù)據(jù)庫(kù)中下載了中國(guó)其他七個(gè)地區(qū)的家養(yǎng)反芻類(綿羊、山羊)的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(chóng)nadh4單倍型序列,共計(jì)142條。AMOVA分析有94.21%的變異是出現(xiàn)種群內(nèi)部,僅有5.35%的變異出現(xiàn)種群間。無(wú)論進(jìn)化樹(shù)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)還是單倍型網(wǎng)絡(luò)圖,來(lái)自野生巖羊與家養(yǎng)反芻類的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(chóng)之間無(wú)任何分化。種群間Fst數(shù)值趨近0,種群間的基因流指數(shù)Nm幾乎全部大于1。因此野生巖羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(chóng)種群與家養(yǎng)反約類捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(chóng)種群之間無(wú)種群分化,且存在較高的基因流。
【圖文】：

２．４．１巖羊毛尾線蟲(chóng)形態(tài)學(xué)特征逡逑經(jīng)２．２．１步驟處理后，共從該巖羊的盲腸中分離得到４條毛尾線蟲(chóng)成蟲(chóng)。顯微鏡下逡逑觀察，，均為雌性。根據(jù)尾部形態(tài)學(xué)特征，初步可以分為兩種。形態(tài)如圖２－１所示：逡逑丨歐：秦逡逑圖２－１兩種毛尾線蟲(chóng)尾部形態(tài)學(xué)及蟲(chóng)卵結(jié)構(gòu)照片。比例尺：ａ，邋１００邋ｐｍ；邋ｂ，２０邋ｐｍ；邋ｃ，１００邋ｐｍ；邋ｄ，邋２０邋ｐｍ．逡逑Ｆｉｇ邋２－１邋Ｐｈｏｔｏｍｉｃｒｏｇｒａｐｈｓ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｔｗｏ邋Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ邋ｓｐｅｃｉｅｓ邋ｉｓｏｌａｔｅｄ邋ｆｒｏｍ邋ｔｈｅ邋ｗｉｌｄ邋ｂｌｕｅ邋ｓｈｅｅｐ，邋ａ．邋ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ逡逑ｅｎｄ邋ｏｆ邋Ｔ．邋ｓｂｊａｂｉｎｉ；邋ｂ．邋ｅｇｇｓ邋ｏｆ邋Ｔ．邋ｓｋｒｊａｂｉｎｉ；邋ｃ．邋ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ邋ｅｎｄ邋ｏｆ邋Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ．邋ｓｐ＼邋ｄ．邋ｅｇｇｓ邋ｏｆ邋Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ．邋ｓｐ．邋Ｓｃａｌｅ逡逑ｂａｒｓ：邋ａ，邋１００邋｜ｉｍ；邋ｂ，邋２０邋＾ｉｍ；邋ｃ，邋１００邋ｆｉｍ；邋ｄ，邋２０邋｜ｉｍ．逡逑圖２－１中的ａ和ｂ屬于其中一類毛尾線蟲(chóng)成蟲(chóng)和蟲(chóng)卵，ｃ和ｄ屬于毛尾線蟲(chóng)的另一逡逑種。上圖箭頭所示，毛尾線蟲(chóng)的尾部結(jié)構(gòu)出現(xiàn)明顯的差異。對(duì)于這兩種類型毛尾線蟲(chóng)蟲(chóng)逡逑卵，兩端都存在明顯的栓塞。此外，對(duì)兩種類型蟲(chóng)卵的大小進(jìn)行了測(cè)量。１＞：７１．０５－逡逑７６．５６邋ｘ邋３７．６３邋－邋４０．５２邋（７４．２２邋ｘ邋３８．８４，邋ｎ邋＝邋１２）邋；邋ｄ：邋６３．３８邋－邋７３．０８邋ｘ邋３４．８４邋－邋３７．１９邋（６８．１９邋ｘ逡逑３６．２６

序列號(hào)為ＭＧ５７３３０５邋－邋ＭＧ５７３３０８。經(jīng)序列的注釋解析，四條１８Ｓ－ＩＴＳ１－５．８Ｓ逡逑序列的中１８Ｓ的長(zhǎng)度為２６２邋－邋２６２ｂｐ，ＩＴＳ１序列的長(zhǎng)度范圍為（４７０到４９５ｂｐ），擴(kuò)增得逡逑到的５．８Ｓ的序列長(zhǎng)度一致，均為ｌｌｂｐ下圖（
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S858.9

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 汪作民;李文志;宗澤君;梁春燕;夏國(guó)忠;;羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(chóng)、細(xì)

本文編號(hào)：2702450