【摘要】：炎癥是許多疾病最基本的病理過(guò)程,而炎癥反應(yīng)與免疫機(jī)制密不可分。中草藥多糖由于自身天然無(wú)毒、無(wú)殘留等特殊優(yōu)點(diǎn),有效避免了化學(xué)藥物的毒副作用,對(duì)于研制低毒高效的新型抗炎免疫藥有著明顯的開發(fā)優(yōu)勢(shì)。甘草多糖(Glycyrrhiza polysaccharide,GP)是甘草主要的活性大分子之一,具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化等生物活性。硒(Selenium,Se)是人體和其他生命形式所必需的微量元素,具有抗氧化、增強(qiáng)免疫、參與輔酶Q合成、降低金屬毒性等功效。研究表明,硒化修飾能夠明顯改善中草藥多糖的生物活性或產(chǎn)生新的藥用價(jià)值,其合成產(chǎn)物-硒化多糖具有重要的研究?jī)r(jià)值和應(yīng)用前景。新疆烏拉爾甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch)作為新疆地區(qū)的道地藥材,具有健脾補(bǔ)氣、清熱解毒等功效。目前認(rèn)為新疆烏拉爾甘草多糖(Glycyrrhiza uralensis Fisch polysaccharide,GUP)是新疆烏拉爾甘草發(fā)揮生物學(xué)功效的主要物質(zhì)基礎(chǔ)之一。本研究從新疆烏拉爾甘草中提取多糖(GUP),對(duì)其進(jìn)行硒化修飾,其次對(duì)硒化新疆烏拉爾甘草多糖(the selenzing polysaccharide,SeGUP)的結(jié)構(gòu)、抗氧化活性、抗炎活性及免疫調(diào)節(jié)進(jìn)行系統(tǒng)研究。目的:旨在硒化修飾有助于改善新疆烏拉爾甘草多糖(GUP)的生物活性,為研制兼具抗炎免疫作用和補(bǔ)硒作用的獸用制劑及補(bǔ)硒飼料添加劑提供理論依據(jù)。方法:1.以新疆烏拉爾甘草為研究對(duì)象,采用水提醇沉法提取粗多糖,通過(guò)去蛋白,去色素,層析柱等純化方法得到GUP。采用HNO_3-Na_2SeO_3法制備SeGUP,并分析其體外抗氧化活性。2.為探索SeGUP的抗炎作用,本研究構(gòu)建以局部腫脹、白細(xì)胞游走、毛細(xì)血管通透性改變?yōu)樘卣骷毙匝装Y模型和以肉芽組織增生為特征的慢性炎癥模型,建立LPS誘導(dǎo)的小鼠單核/巨噬細(xì)胞RAW264.7體外炎癥模型,研究了SeGUP對(duì)RAW264.7細(xì)胞的細(xì)胞因子及其對(duì)NF-?B和MAPKs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響。3.建立完全弗氏佐劑型關(guān)節(jié)炎大鼠(AA)模型,以足趾腫脹程度、大鼠體重、免疫器官指數(shù)和血清炎癥因子水平作為評(píng)價(jià)指標(biāo),考察SeGUP體內(nèi)抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥效。4.通過(guò)測(cè)定各組小鼠免疫器官指數(shù)、碳廓清指數(shù)、血清溶血素、T淋巴細(xì)胞增殖和TNF-?,IL-4,IFN-γ的含量,探討SeGUP對(duì)免疫抑制小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的影響。5.探討SeGUP對(duì)雞新城疫疫苗免疫效果的影響,并從細(xì)胞免疫、體液免疫、免疫調(diào)節(jié)因子活性變化方面,研究SeGUP增強(qiáng)雛雞免疫機(jī)能的可能機(jī)制。結(jié)果:1.GUP經(jīng)HNO_3-Na_2SeO_3法成功制備SeGUP。紫外光譜和紅外光譜鑒定SeGUP中含有O-Se-O,而糖環(huán)結(jié)構(gòu)的構(gòu)型基本不變。發(fā)現(xiàn)SeGUP的熱穩(wěn)定性、電子粒徑和分子量明顯不同于GUP。在體內(nèi)外抗氧化試驗(yàn)中,SeGUP體現(xiàn)出相比GUP更強(qiáng)的抗氧化活性。2.SeGUP(300mg/mL)能夠顯著抑制二甲苯致小鼠耳廓腫脹,顯著抑制角叉菜膠致小鼠足腫脹,顯著降低醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性,顯著抑制棉球致肉芽組織增生。SeGUP(80μg/mL)能夠抑制TNF-?、IL-6和IL-1?分泌,并呈現(xiàn)劑量依賴性。還能抑制NO和PGE_2合成。SeGUP抑制了LPS刺激的小鼠RAW 264.7巨噬細(xì)胞NF-?B和MAPKs蛋白表達(dá),其作用呈劑量依賴方式。3.SeGUP(200 mg/kg)可使AA大鼠足趾腫脹程度顯著下降;恢復(fù)其體重,降低胸腺和脾臟指數(shù)以及血清炎癥因子水平。4.SeGUP(200 mg/kg)可顯著增強(qiáng)免疫抑制小鼠的免疫器官指數(shù)、碳廓清指數(shù)、血清溶血素水平,促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖,顯著提高血清INF-γ、TNF-?和IL-4含量。5.體內(nèi)試驗(yàn)指出,SeGUP組在各時(shí)間點(diǎn)能夠顯著促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖,并顯著強(qiáng)于未修飾GUP;SeGUP組在各時(shí)間點(diǎn)的抗體效價(jià)顯著高于免疫對(duì)照組,在某些時(shí)間點(diǎn)顯著高于未修飾GUP組。結(jié)論:綜上所述,新疆烏拉爾甘草多糖經(jīng)分子修飾后,生物活性發(fā)生了極大的改變。同等劑量的SeGUP的抗炎和免疫調(diào)節(jié)效果優(yōu)于GUP,表明硒化修飾提高GUP的抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用。
【圖文】：

圖 0-1 多糖的硫酸化反應(yīng)Fig 0-1. The sulfated reaction of polysaccharideJiang 等采用常規(guī)熱水浸提的方法制備龍眼多糖，經(jīng) DEAE-52 和 Sephadex G-100 純化得到精制龍眼多糖，試驗(yàn)顯示硫酸化龍眼多糖能夠有效刺激小鼠淋巴細(xì)胞增殖，，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬活性，促進(jìn) TNF- 、NO 和 IL-6 的分泌，抑制鼻咽癌細(xì)胞 HONE1 增殖。

圖 0-2 多糖的羧甲基化反應(yīng)Fig 0-2. The carboxymethylation reaction of polysaccharide羧甲基化法包括水媒法和有機(jī)溶媒法，區(qū)別在于合成工藝中溶媒的選用。相對(duì)水媒法而言，溶媒法優(yōu)點(diǎn)是在堿化、醚化過(guò)程中導(dǎo)熱和傳質(zhì)更迅速，避免發(fā)生副反應(yīng)，合成產(chǎn)物取代度高。Shi 等采用響應(yīng)面法優(yōu)化制備了羧甲基化滸苔多糖（CDPE）并評(píng)價(jià)其體
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S853.74

【參考文獻(xiàn)】

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2 王之s

本文編號(hào)：2695601