【摘要】：卵泡是位于卵巢皮質(zhì),由卵泡膜細胞、顆粒細胞等包裹卵母細胞形成的特殊結(jié)構(gòu),在卵母細胞正常發(fā)育過程中具有支持和保護的重要作用。根據(jù)卵泡的形態(tài)和結(jié)構(gòu)特征,從原始卵泡到成熟卵泡的整個卵泡發(fā)育階段,卵泡又可以分為腔前卵泡和有腔卵泡。此前的大量研究主要集中在有腔卵泡,并已證實發(fā)育動態(tài)主要受到促性腺激素FSH和LH的調(diào)控。然而,對于腔前卵泡發(fā)育的相關(guān)研究非常有限,目前比較明確的是其對于促性腺激素的依賴程度很低。然而,腔前卵泡發(fā)育的核心調(diào)控機制是什么,卻一直沒能得到回答。該研究發(fā)現(xiàn),C型鈉肽(C-type natriuretic peptide,CNP)具有促進腔前卵泡發(fā)育的效果。進一步的實驗提示,CNP在腔前卵泡發(fā)育中,會被顯著的激活。據(jù)此,本研究推測CNP在腔前卵泡發(fā)育中具有重要功能。為此,該論文在以下幾方面開展了研究:(1)系統(tǒng)分析了在不同階段腔前發(fā)育以及有腔卵泡中CNP及其受體NPR2的表達特征,發(fā)現(xiàn)CNP和NPR2均定位于腔前卵泡的顆粒細胞中,并且在腔前卵泡發(fā)育過程中不斷上調(diào)。(2)利用體外培養(yǎng)的腔前卵泡作為模型,通過向培養(yǎng)液中添加不同濃度的CNP(0.1、1、10、100、500nM),我們發(fā)現(xiàn)在無FSH條件下,10nM以上的CNP可以以濃度依賴的方式,單獨促進腔前卵泡的生長。(3)為了揭示CNP對腔前卵泡發(fā)育的促進作用,我研究了 CNP對腔前卵泡顆粒細胞增殖的影響,發(fā)現(xiàn)在低血清體系下,CNP可以以劑量依賴的形式,顯著地促進顆粒細胞增殖,提高顆粒細胞活力。(4)我們分別利用成年(8周齡)和幼齡(13日齡)小鼠,通過腹腔注射CNP預處理后接受超排實驗來研究CNP在體內(nèi)條件下對卵泡發(fā)育的影響,結(jié)果顯示CNP可以顯著增加總排卵數(shù)和可用卵數(shù)。(5)為了探究腔前顆粒細胞中Nppc和Npr2的表達調(diào)控機制,我們研究了卵母細胞來源的生長因子對腔前顆粒細胞中CNP和NPR2的表達的影響,結(jié)果顯示BMP15、GDF9等對Nppc和Npr2表達有不同程度的促進作用,并且這些因子之間表現(xiàn)出協(xié)同作用。(6)為了更準確的理解CNP對腔前卵泡生長影響的作用,我們研究了 CNP對腔前卵泡中與卵泡發(fā)育、雌激素代謝相關(guān)基因的表達,結(jié)果顯示CNP對這些過程可能存在顯著的影響。綜上所述,該研究證實了 CNP體內(nèi)外均可以促進小鼠腔前卵泡生長,同時證明了 CNP-NPR2信號促進顆粒細胞增殖是其調(diào)控腔前卵泡發(fā)育的重要調(diào)節(jié)機制之一;卵母細胞來源的生長因子對Nppc和Npr2的表達具有顯著的影響;CNP可能會通過影響WNT信號和雌激素合成進而實現(xiàn)其促進腔前卵泡生長、顆粒細胞增殖的作用。這些結(jié)果不僅是對腔前卵泡發(fā)育機制的重要補充,同時也豐富了卵泡發(fā)育過程中卵母細胞和體細胞的對話機制。
【學位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S814.1

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