【摘要】：腸道炎癥能引起斷奶仔豬消化吸收能力下降,影響仔豬的生長發(fā)育和生產(chǎn)性能,給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大經(jīng)濟損失。腸道炎癥的發(fā)生與機體免疫反應的過度激活以及活性氧的過量產(chǎn)生密切相關(guān)。通過營養(yǎng)調(diào)控措施調(diào)節(jié)免疫反應及活性氧生成來改善腸道健康已成為近年來動物營養(yǎng)學上關(guān)注的熱點問題之一。羥脯氨酸(Hyp)是一種膠原蛋白和豬乳中含量豐富的氨基酸衍生物,現(xiàn)有證據(jù)表明Hyp可能對炎癥和氧化應激具有一定的抵抗作用。本研究結(jié)合動物試驗和體外培養(yǎng)的細胞試驗,運用組織學、細胞與分子生物學技術(shù),探究了Hyp對腸道的抗炎、抗氧化作用及其機制。試驗一以葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導的雄性C57BL/6腸炎小鼠為模型,研究了 Hyp對結(jié)腸炎的緩解作用。結(jié)果表明:2.5%DSS誘導的結(jié)腸炎小鼠表現(xiàn)為體重減輕、疾病活動指數(shù)(DAI)和組織學評分增加、結(jié)腸縮短和髓過氧化物酶活性增加。補充1%Hyp可顯著改善上述變化并降低腸黏膜固有層單核細胞的比例,包括嗜中性粒細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞、自然殺傷細胞、輔助性T細胞和B淋巴細胞。此外,Hyp能顯著抑制DSS引起的活性氧及丙二醛產(chǎn)生量的增加,提高谷胱甘肽含量和超氧化物歧化酶活性。Hyp處理顯著降低了結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織中促炎因子白細胞介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的含量,同時也顯著降低了炎性結(jié)腸組織中抗炎因子IL-10和趨化因子CXCL1和CXCL2的imRNA 水平。DSS引起核因子κB(NF-κB)和信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3)的磷酸化水平明顯升高,Hyp顯著抑制了這一變化。結(jié)果提示,Hyp能夠通過增強結(jié)腸組織抗氧化能力、減輕白細胞亞型的浸潤緩解DSS誘導的炎性損傷,其機制可能與抑制NF-κB和STAT3的磷酸化有關(guān)。試驗二用體外培養(yǎng)的小鼠巨噬細胞系(RAW264.7)探究了 Hyp能否抑制脂多糖(LPS)誘導的炎性反應。結(jié)果發(fā)現(xiàn),0.5、1或2 mM的Hyp劑量依賴性降低LPS(100 ng/mL)誘導的iNOS、PTGS2、IL-6、IL-1β和CXCL1 mRNA水平的增加,減少NF-κB p65和STAT3的磷酸化以及NF-κB p65的核移位。LPS引起的iNOS、PTGS2、IL-6、IL-1β和CXCLImRNA的表達以及STAT3磷酸化水平的升高,能夠被NF-κB抑制劑Bay1 1-7085所抑制,提示Hyp減輕LPS誘導的巨噬細胞炎癥反應依賴于NF-κB信號。試驗三研究了 Hyp對4-羥基壬烯醛(4-HNE)誘導的豬腸上皮細胞(IPEC-1)凋亡和DNA損傷的影響。結(jié)果表明,5mMHyp能明顯抑制4-HNE(40 μM)誘導的細胞凋亡、活性氧增加,減少H2AX、JNK和p38MAPK的磷酸化、降低GADD45a/b的mRNA水平。Hyp顯著提高了 4-HNE誘導的Kruppel樣轉(zhuǎn)錄因子(KILF4)蛋白水平的升高,用Kenpaullone抑制KLF4的表達后,明顯促進了 4-HNE引起的細胞凋亡和DNA損傷,提示其在Hyp對4-HNE誘導的IPEC-1細胞凋亡和DNA損傷的保護作用中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。以上結(jié)果表明,Hyp能夠增加腸上皮細胞的抗氧化能力,緩解腸道炎癥反應,改善腸道健康。這些發(fā)現(xiàn)為羥脯氨酸對動物腸道發(fā)揮的抗氧化、抗炎作用奠定了理論基礎。
【圖文】：

圖１－１免疫細胞在腸黏膜先天性和適應性免疫反應中的作用逡逑注：巨噬細胞、嗜中性粒細胞、自然殺傷細胞（ＮＫ細胞）在腸道的先天性免疫中發(fā)揮重要作用。樹突狀細胞作逡逑為抗原呈遞細胞能夠激活Ｔ細胞，誘導適應性免疫反應。激活的幼稚ＣＤ４Ｔ細胞能夠分化成調(diào)節(jié)性Ｔ細胞和不逡逑同類型的輔助性Ｔ細胞。輔助性Ｔ細胞有利于促進Ｂ細胞的活化。激活后的幼稚ＣＤ８１細胞則能夠分化成毒性逡逑Ｔ細胞。Ｂ細胞產(chǎn)生的抗體和毒性Ｔ細胞能夠特異性攻擊病原體。圖片參考文獻１２８］繪制，略有補充。逡逑

中國農(nóng)業(yè)大學博士學位論文邐緒論逡逑而提高ＮＦ－ｋＢ的轉(zhuǎn)錄活性ＴＮＦ－ａ激活的ＮＦ－ｋＢ又可通過其作用的勒基因抑制ＪＮＫ的活性來逡逑促進細胞的存活＿。逡逑Ｊａｎｕｓ激酶（Ｊａｎｕｓ邋ｋｉｎａｓｅ，邋ＪＡＫ）介導的信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子３邋（ｓｉｇｎａｌ邋ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ邋ａｎｄ逡逑ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ邋ａｃｔｉｖａｔｏｒ邋３，邋ＳＴＡＴ３）的活化在調(diào)節(jié)細胞生長、分化、存活和死亡方面有著重要的作逡逑用。在ＩＬ－６家族細胞因子白細胞抑制因子（ＬＩＦ）和過氧化氫的共同作用下，可引起ＪＡＫ／ＳＴＡＴ３逡逑信號通路的持續(xù)激活在人類淋巴細胞上也發(fā)現(xiàn)了氧化應激引起的ＳＴＡＴ３的酪氨酸磷酸化以逡逑及核轉(zhuǎn)移１１Ｑ２］。ＳＴＡＴ３在氧化應激條件下發(fā)揮抑制氧化損傷、促進細胞存活的作用，缺失ＳＴＡＴ３逡逑的細胞對氧化應激的敏感性增強［１Ｄ３－１％】》ＳＴＡＴ３可抑制氧化應激引起的ＡＳＫｌ／ｐ３８邋ＭＡＰＫ介導的逡逑細胞凋亡［１Ｇ７］。ＲＯＳ可通過激活ＮＦ－ｋＢ導致ＩＬ－６表達增加，ＩＬ－６作用于其受體激活ＪＡＫ／ＳＴＡＴ３信逡逑號途徑【１（）８，ＩＧ９］。ＲＯＳ也可通過降低ＳＨＰ－１酪氨酸a愃崦富钚砸穡櫻裕粒裕車募せ睿郟保�？，１１１Ｊn３て諞岳�，辶x希櫻裕粒裕吃諮仔猿Σ≈械淖饔靡鵒斯惴汗刈�，言ＡＴ３灾O忍煨悅庖吆突竦瞇悅庖呦赴蟹⒒硬煌義系淖饔�，灾O忍煨悅庖叻從討鋅捎桑桑蹋保被潁桑蹋玻布せ睿俳さ鞍撞宛つさ男薷矗輝諢皴義系瞇悅庖呦赴杏桑桑蹋痘潁桑蹋保導せ�，颖K跡裕危疲跡澩鐫黽硬⒎⒒涌溝蟯鱟饔茫郟浚玻蕁ｅ義希，

本文編號：2674467