【摘要】：烯丙孕素一種人工合成的口服留類促孕激素,有明顯的孕激素和抗促性腺激素作用,可抑制排卵。在國外獸醫(yī)臨床實踐中,烯丙孕素主要用于母豬、母馬的同期發(fā)情;而在國內(nèi)獸醫(yī)臨床實踐中,它還未廣泛使用,僅初步用于促進母豬同期發(fā)情、促進乏情母豬的發(fā)情、延遲后備母豬的發(fā)情、延遲母豬的分娩時間。本實驗通過建立豬可食性組織中烯丙孕素殘留量的HPLC-MS/MS檢測方法,進而研究烯丙孕素口服液在豬組織中的殘留消除規(guī)律,為制定國產(chǎn)烯丙孕素口服溶液在豬體內(nèi)的休藥期提供依據(jù)。1、建立豬可食性組織中烯丙孕素殘留量的HPLC-MS/MS檢測方法肝臟和腎臟樣品,經(jīng)β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶酶解,后乙腈提取(肌肉和脂肪樣品直接用乙腈提取),乙腈飽和正己烷溶液除脂,氮吹后殘渣用乙酸乙酯復溶,后用10%碳酸鈉溶液凈化進行HPLC-MS/MS分析。提取的樣品采用Thermo C18(3×100 mm,1.7 μm)分離,柱溫30 ℃;進樣量10 μL,流動相為5 mM甲酸銨溶液和乙腈,外標法定量。結(jié)果表明:在1-200 μg/kg范圍內(nèi),烯丙孕素具有良好的線性關系,相關系數(shù)大于0.999,方法的檢測限為0.5 μg/kg,定量限為1 ug/kg;在1、2、5 μg/kg添加水平下,化合物的平均回收率在60%～110%之間,批內(nèi)與批間變異系數(shù)均小于11%。本實驗建立的烯丙孕素提取凈化和檢測方法適用于豬可食性組織中烯丙孕素殘留量的定量分析。2、烯丙孕素口服液在豬體內(nèi)殘留消除研究及休藥期的研究20頭母豬(平均體重為50 kg)用于殘留消除試驗。將烯丙孕素口服液按臨床推薦劑量(20mg/tou)給豬內(nèi)服給藥,連續(xù)18d,停藥后分別于6h、1d、5d、10d和18d共5個時間點各隨機屠宰組4頭豬,采集肌肉、肝臟、腎臟、脂肪(皮下脂肪)樣品。采用上述烯丙孕素殘留量測定方法測定豬可食性姐織中烯丙孕素殘留。結(jié)果顯示,停藥后6 h各組織均達到最高藥物濃度,其中肝臟殘留最高,平均殘留量為259.25 μg/kg,其次依次是腎臟、皮脂、肌肉,平均殘留量分別為52.33 μg/kg.49.22μg/kg.25.85 μg/kg;停藥1d時,肝臟、腎臟、皮脂和肌肉中烯丙孕素的平均殘留量分別降至33.93 μg/kg、11.27 μg/kg、41.95 μg/kg和8.95μg/kg。停藥5 d時,4頭豬中僅一頭豬的肝臟中烯丙孕素的殘留量高于MRLs(2 μg/kg),達到2.81 μg/kg;另3頭豬中,來自1頭豬的肝臟中烯丙孕素的殘留量高于定量限,其它組織中烯丙孕素的殘留量均低于定量限。停藥10 d時,豬所有組織中烯丙孕素的殘留量都低于檢測限。殘留消除試驗結(jié)果表明,肝臟是烯丙孕素在豬體內(nèi)殘留靶組織。按照歐盟EMEA規(guī)定的最高殘留限量標準,將停藥后各時間點獲得的豬各組織中烯丙孕素殘留量實測數(shù)據(jù)采用WT1.4休藥期軟件計算,得出烯丙孕素在豬肝臟中休藥期為8.67天;烯丙孕素在豬皮脂中的休藥期依據(jù)實測濃度法可暫定為5天。依據(jù)烯丙孕素口服液在性成熟后備母豬的可食性組織中殘留消除研究結(jié)果,建議寧波第二激素廠生產(chǎn)的烯丙孕素口服液按推薦給藥方案用藥,休藥期可暫定為9 d。
【圖文】：

邐揚州大學碩士學位論文邐Ｗ逡逑々——對照溶液中相應烯丙孕素的色譜峰面積；逡逑ｍ邋邐試樣的質(zhì)量（ｇ）；逡逑Ｆ＿溶解殘余物所用試樣溶液體積（ｍＬ）。逡逑注：計算結(jié)果需扣除空白值，測定結(jié)果用平行測定的算術平均值表示，保留３位有效數(shù)逡逑字。逡逑３結(jié)果逡逑３．１色譜行為逡逑空白組織、空白組織添加標準品色譜圖分別見下圖１？８。逡逑［￣￣■邋－ＭＶｔＳ２邋（３１邋１邋１０＞邋ＣＥ邋＜３Ｓ＞邋ｉ）邋ｒｗｏｖ邋？ｃａｎ？邋ｆｒｏｍ邋Ｓｏｒｒｐｌｏ邋３邋ＣＯ0Ｘ＞邋＾ｌ）邋ｏｆ邋２０１＆－８－２Ｓ．ＶＵＷ邋0ＶｌｔＸ＞邋Ｓｐｒａｙ）邐？Ｖｔａｏ＜邋１邋Ｏａ７邋ｃｒ＊．逡逑，邐奶邐°Ｐ＊逡逑

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【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S859.84

【參考文獻】

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本文編號：2673407