【摘要】：本論文對豬日糧內源代謝葡萄糖評定方法進行了研究。首先,利用“穩(wěn)定性同位素示蹤法”向豬回腸末端瘺管灌注~(13)C-VFA(乙酸、丙酸和丁酸同位素)示蹤豬大腸產生的揮發(fā)性脂肪酸的各個去路,得到血液、腸壁組織和大腸內容物樣品,通過GC-MS(氣相質譜儀)建立測定豬血液、大腸組織和大腸內容物中乙酸、丙酸和丁酸以及各自同位素含量的方法;再進行正式動物飼養(yǎng)試驗,采用“回腸末端灌注法”和“動-靜脈濃度差法”,結合同位素示蹤,計算出大腸丙酸吸收量和門靜脈乳酸凈吸收量,根據豬日糧內源代謝葡萄糖的計算公式,得到三種不同代謝葡萄糖水平的豬日糧內源代謝葡萄糖含量;最后將上述三種日糧通過體外模擬“胃-小腸”消化后,進行體外模擬大腸微生物發(fā)酵,測定丙酸和乳酸的產生量,將體外丙酸和乳酸的產生量分別與體內大腸丙酸吸收量和門靜脈乳酸凈吸收量進行回歸分析,通過它們之間的回歸方程,建立體外估測日糧內源代謝葡萄糖的方法,并通過此方法估測玉米、豆粕、大豆皮和小麥麩四種原料中內源代謝葡萄糖值。論文分為3個部分:試驗一、GC-MS測定~(13)C標記的揮發(fā)性脂肪酸方法的研究選取1頭體重為30 kg左右的健康生長豬,飼喂以玉米、豆粕為基礎的日糧。預飼3天后,對試驗豬安裝回腸末端“T”型瘺管,股動脈、門靜脈血管瘺管。手術恢復后,從回腸“T”型瘺管處灌注同位素~(13)C標記的乙酸、丙酸、丁酸。灌注結束后,采集血液,并將豬屠宰,采集盲腸、結腸和直腸整段腸道并稱重,收集這三段腸道的內容物。通過設定并調整GC-MS條件,建立氣相質譜儀測定血液、腸道組織和腸道內容物中~(13)C標記的和未標記的乙酸、丙酸、丁酸含量的方法。結果表明,6種VFA在對應的濃度范圍內,線性關系良好;批內精密度和批間精密度及準確度較好。本研究可作為一種簡單、快速且準確分析豬血液、大腸組織和大腸內容物中~(13)C穩(wěn)定性同位素標記的揮發(fā)性脂肪酸含量的方法。試驗二、體內法評定生長豬三種日糧內源代謝葡萄糖水平選取15頭平均體重為30 kg左右的健康生長豬,隨機分為3個處理組,每個處理組5個重復,飼喂以玉米、豆粕為基礎的等氮、代謝葡萄糖水平不同的3種日糧。預飼3天后,給試驗豬安裝回腸末端“T”型瘺管,股動脈、門靜脈和腸系膜血管瘺管。術后至采食量恢復正常后,從腸系膜血管瘺管遠端灌注對氨基馬尿酸,同時從回腸“T”型瘺管處灌注同位素~(13)C標記的丙酸。采集門靜脈和股動脈血樣。灌注結束后,將豬屠宰,采集盲腸、結腸和直腸整段腸道并稱重,通過試驗一中的方法,測定血液和腸壁中丙酸和丙酸同位素的含量,并用試劑盒測定血液中乳酸含量。采用“動-靜脈濃度差法”計算門靜脈丙酸和乳酸的凈吸收量。根據乳酸門靜脈凈吸收量和丙酸大腸吸收量來計算日糧內源代謝葡萄糖水平。結果表明,丙酸門靜脈凈吸收量日糧Ⅰ組最低,日糧Ⅱ組最高,三組之間差異不顯著(P0.05)。丙酸大腸沉積量日糧Ⅰ組最高,日糧Ⅲ組最低且顯著低于日糧Ⅰ組(P0.05)。丙酸大腸吸收量日糧Ⅲ組最低,日糧Ⅰ組最高且顯著高于日糧Ⅲ組(P0.05)。乳酸門靜脈凈吸收量日糧Ⅲ組最高,Ⅱ組最低且顯著低于Ⅲ組(P0.05)。生長豬三種日糧內源代謝葡萄糖含量日糧Ⅱ組最低,Ⅰ組最高且顯著高于Ⅱ組(P0.05)。生長豬三種日糧內源代謝葡萄糖含量日糧Ⅰ組最高,Ⅱ組最低且顯著低于Ⅰ組(P0.05)。本試驗條件下,三種日糧丙酸大腸吸收量分別為15.21、13.33和8.13 g/d,乳酸門靜脈凈吸收量分別為7.57、3.17和12.04 g/d,內源代謝葡萄糖水平分別為61.07、44.22和55.10 g/kg;通過結合~(13)C丙酸示蹤,研究大腸丙酸吸收量,提高了日糧內源代謝葡萄糖測定方法的準確度。試驗三、體外法評定生長豬三種日糧內源代謝葡萄糖水平將試驗二中的日糧粉碎過篩作為底物,體外模擬“胃-小腸消化”后,收集殘渣并烘干粉碎,再進行體外發(fā)酵產氣法的研究,測定發(fā)酵產生的丙酸和乳酸的含量,將體外丙酸和乳酸的產生量分別與體內大腸丙酸吸收量和門靜脈乳酸凈吸收量進行回歸分析,通過它們之間的回歸方程,建立體外估測日糧內源代謝葡萄糖的方法,并測定玉米、豆粕、大豆皮和小麥麩四種飼料原料內源代謝葡萄糖的含量。結果表明,48 h時,體內大腸丙酸吸收量與體外發(fā)酵丙酸產生量之間、體內乳酸門靜脈凈吸收量與體外發(fā)酵乳酸產生量之間,線性關系較好。本試驗條件下,體外發(fā)酵48 h時,三種日糧體內大腸丙酸吸收量與體外發(fā)酵丙酸產生量之間的關系為Y=3.8268X-6.8329,R~2=0.9683;體內乳酸門靜脈凈吸收量與體外發(fā)酵乳酸產生量之間的關系為Y=0.5900X+3.1967,R~2=0.9666,根據這兩個表達式建立了測定日糧內源代謝葡萄糖水平的體外估測方法。并通過此方法估測了四種常用飼料原料玉米、豆粕、大豆皮和小麥麩中內源代謝葡萄糖含量分別為177.55、32.83、58.02和14.83 mg/g。
【圖文】：

葡萄糖化學結構示意圖

六種揮發(fā)性脂肪酸混合標樣提取的乙酸和丁酸色譜圖
【學位授予單位】：武漢輕工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S828.5

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本文編號：2669961