【摘要】：囊型包蟲(chóng)病(CE)是由細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)(Echinococcus granulosus,E.g)引起的廣泛的人畜共患寄生蟲(chóng)病。CE是一種復(fù)雜的疾病,其致病機(jī)理和免疫反應(yīng)等方面的問(wèn)題還待解決。原頭蚴(Protoscoleces,PSC)是E.g的幼蟲(chóng)階段的一種形態(tài),可以與中間宿主發(fā)生免疫反應(yīng)。PSC如何通過(guò)破壞宿主的免疫反應(yīng),產(chǎn)生病灶,其致病機(jī)制尚不清楚。本研究通過(guò)對(duì)PSC的體外培養(yǎng)觀察以及PSC侵染小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7試驗(yàn),從細(xì)胞水平和轉(zhuǎn)錄組水平揭示宿主-寄生蟲(chóng)互作機(jī)制。1.細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)原頭蚴(PSC)的體外培養(yǎng)及觀察:為了研究PSC在宿主體外環(huán)境的生長(zhǎng)發(fā)育特征,本試驗(yàn)建立了原頭蚴的體外培養(yǎng)體系。試驗(yàn)結(jié)果表明,培養(yǎng)至第10d時(shí),蟲(chóng)體開(kāi)始向成囊發(fā)育;第25d50%的原頭蚴已經(jīng)完全發(fā)育成囊;第35d90%的原頭蚴完全發(fā)育成微囊,囊泡內(nèi)的角質(zhì)層增厚,頂突處的頭溝完全消失;第50d時(shí),微囊逐漸增大,囊壁逐漸增厚;第70d微囊破裂,囊壁角質(zhì)層內(nèi)陷,蟲(chóng)體衰亡。本試驗(yàn)成功建立細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)原頭蚴的體外培養(yǎng)體系,研究了原頭蚴在體外情況下的生長(zhǎng)發(fā)育情況。2.PSC侵染RAW264.7細(xì)胞NO的變化規(guī)律研究:分別用PSC、包囊壁和囊液感染小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7,用Griess試劑檢測(cè)不同侵染時(shí)間段NO含量的變化。結(jié)果顯示,PSC可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO,巨噬細(xì)胞通過(guò)釋放NO來(lái)抵御原頭蚴的侵害;包囊壁既可以為蟲(chóng)體的生存提供寄生環(huán)境,也可使宿主防御寄生蟲(chóng)的侵害;包囊液對(duì)巨噬細(xì)胞的侵害不顯著,可能為原頭蚴的生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)。本文通過(guò)研究NO在巨噬細(xì)胞抵抗棘球蚴感染時(shí)的變化規(guī)律,為揭示宿主在抵抗寄生蟲(chóng)感染時(shí)的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。3.PSC侵染RAW264.7細(xì)胞因子的變化規(guī)律研究:通過(guò)研究PSC侵染小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7后Th1和Th2型細(xì)胞產(chǎn)生的4種細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ隨侵染時(shí)間的變化,探討Th1和Th2細(xì)胞在蟲(chóng)體與宿主細(xì)胞直接接觸后再次免疫中的意義。結(jié)果表明,感染的初期,蟲(chóng)體對(duì)細(xì)胞的損傷最嚴(yán)重,蟲(chóng)體與宿主細(xì)胞相互作用的過(guò)程中免疫保護(hù)和免疫損傷同時(shí)進(jìn)行,且主要以Th1型細(xì)胞因子分泌為主,Th2型細(xì)胞因子分泌為輔。4.PSC侵染RAW264.7基因差異表達(dá)分析:通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和生物信息學(xué)分析等不同手段,對(duì)PSC侵染小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7不同時(shí)間段蟲(chóng)體以及宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行了分析。研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)PSC侵染RAW264.7細(xì)胞,PSC中顯著上調(diào)的基因包括Proteinase inhibitor、Serine proteases、Glycoside hydrolase、Phospholipase A2、MHC class I、Immunoglobulin、EF-Hand 1、Tumour necrosis factor、p53-like transcription factor等。對(duì)顯著上調(diào)的基因GO分析顯示其主要參與氧化、代謝等相關(guān)過(guò)程;KEGG分析顯示顯著上調(diào)的基因主要參與代謝及環(huán)境信息處理等過(guò)程。巨噬細(xì)胞中顯著上調(diào)基因有Antigen B、HSP70、FABP1、Proteinase inhibitor 12、BMTI6、Glutamate dehydrogenase等。GO富集主要為生物學(xué)過(guò)程和分子功能,主要參與氧化、代謝、免疫等相關(guān)生物學(xué)過(guò)程。KEGG分析顯示顯著上調(diào)的基因主要參與代謝等過(guò)程。通過(guò)分析蟲(chóng)體及細(xì)胞的免疫因子和生物酶的功能,進(jìn)一步揭示宿主-寄生蟲(chóng)互作的生理機(jī)制,為抗蟲(chóng)疫苗提供新靶標(biāo)。
【圖文】：

2圖 1-2 細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)包囊結(jié)構(gòu)Fig.1-2 The Cyst structural of E.gadventitial layer：外膜層；laminated layer：肌層，LL；ost tissue; adventitial layer; laminated layer: LL; germinal l展抗外界感染的第一道防線，主要取決于宿的生理因素。對(duì)小鼠包蟲(chóng)病體外及體內(nèi)的促進(jìn)炎癥的發(fā)展。細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)六鉤蚴可成熟來(lái)逃避宿主的免疫反應(yīng)。有研究表明

圖 1-2 細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)包囊結(jié)構(gòu)Fig.1-2 The Cyst structural of E.gsue：宿主組織；adventitial layer：外膜層；laminated layer：肌層，，LL； germinal layer：生圖 1-1 細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)生活史Fig.1-1 The life cycle of E.g
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：S852.734

【參考文獻(xiàn)】

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