【摘要】：禽致病性大腸桿菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)常引起家禽發(fā)生多種腸道外疾病如心包炎、氣囊炎、肝周炎、蜂窩織炎及敗血癥,具有較高的感染率和死亡率,給養(yǎng)禽業(yè)帶來嚴(yán)重?fù)p失。以本實驗室構(gòu)建的禽致病性大腸桿菌脂多糖缺失株E516△lpxL△lpxM(O1)、E058△lpxL△lpxM(O2)、E522△lpxL△lpxM(078)株作為制苗菌株等比例混合,分別輔以白油佐劑道達(dá)爾170、白油佐劑Marc52和鋁膠佐劑研制了相應(yīng)三價滅活疫苗,并對三種佐劑疫苗進(jìn)行了安全性和免疫效力比較試驗,以確定合適的疫苗佐劑。疫苗佐劑確定后,對該三價疫苗的免疫持續(xù)期進(jìn)行研究。現(xiàn)將研究結(jié)果報告如下:1、三種不同佐劑疫苗的安全性比較利用制備的三種不同佐劑滅活疫苗,分別以單劑量0.5 mL/羽和雙倍劑量1.0 mL/羽接種14日齡SPF雞進(jìn)行安全性試驗。試驗結(jié)果表明,注射白油佐劑滅活疫苗組的雞,以單劑量0.5 mL/羽免疫,接種疫苗后12-24 h,部分雞出現(xiàn)短時精神沉郁,之后無任何不良反應(yīng):以雙倍劑量1 mL/羽免疫時,接種疫苗后5-8 h試驗雞出現(xiàn)精神不佳,24 h內(nèi)恢復(fù)正常,由于雙倍劑量組免疫劑量較大,部分試驗雞注射部位出現(xiàn)0.1-1.2 cm大小不等的結(jié)節(jié),但未出現(xiàn)全身不良反應(yīng),免疫一周注射部位結(jié)節(jié)逐漸消失,生長狀況良好。注射鋁膠佐劑滅活疫苗組的雞,在整個觀察期內(nèi)飲食和精神狀態(tài)均正常,注射部位亦未見異常。以上結(jié)果說明我們所研制的油佐劑疫苗具有良好的安全性。2、三種不同佐劑疫苗的免疫效力試驗以三種不同佐劑疫苗對14日齡SPF雞進(jìn)行免疫,42日齡時分別以親本株E516(O1)、E058(02)和E522(078)攻毒,進(jìn)行免疫保護試驗。試驗結(jié)果表明,白油佐劑道達(dá)爾170疫苗組攻毒后保護比均為7/10,白油佐劑Marc52疫苗組攻毒后保護比分別為5/10、5/10和7/10,鋁膠佐劑疫苗組攻毒后保護比分別為3/10、3/10和5/10,攻毒對照組攻毒后死亡比均為10/10。以上試驗結(jié)果表明,鋁膠佐劑疫苗對同源野生株攻毒雞的免疫保護效果差,白油佐劑道達(dá)爾170和白油佐劑Marc52疫苗尤其是前者對同源野生株攻毒雞可以提供良好的免疫保護。綜合安全性試驗和免疫保護試驗,我們確定白油佐劑道達(dá)爾170佐劑作為研制疫苗的佐劑。3、雞致病性大腸桿菌脂多糖缺失株三價滅活疫苗的免疫持續(xù)期試驗以雞致病性大腸桿菌脂多糖缺失株三價滅活疫苗對14日齡SPF雞進(jìn)行免疫,分別在免疫后第30 d、第60 d和第90 d進(jìn)行親本株攻毒試驗,對保護效力、特異性抗體水平及組織病理變化進(jìn)行評價。試驗結(jié)果表明,免疫后第30 d、第60 d和第90 d攻毒,試驗雞均得到不同程度較好保護。由于成年雞對致病性大腸桿菌的敏感性降低,90日齡試驗雞攻毒對照組死亡比減少屬于正常現(xiàn)象。白羽肉雞的生長周期一般在9周以內(nèi),該疫苗應(yīng)用在白羽肉雞上,一次性免疫即可得到有效的保護。綜合多因素考慮,我們暫定雞致病性大腸桿菌脂多糖缺失株三價滅活疫苗的免疫持續(xù)期為3個月。
【圖文】：

提ＬＰＳ樣品含糖量測定：逡逑好的ｌｍＬ粗制ＬＰＳ溶液，加３邋ｍＬ蒽酮試劑混合均勻后，進(jìn)行冷卻，１０邋ｍｉｎ，冷卻至室溫后，利用分光光度計進(jìn)行吸光度ＯＤ６２Ｑ測定。逡逑準(zhǔn)葡萄糖含量標(biāo)準(zhǔn)曲線的出回歸方程＞＝－丨９７也２＋１９０．４４NB－丨丨．丨６（１１２＝０．９８６Ｄ６２0值代入上述回歸方程中求得ＬＰＳ糖含量，依據(jù)換算情況，，將所得結(jié)ＬＰＳ濃度（ｎｇ／ｍＬ）。將確定濃度的粗提ＬＰＳ溶液分裝于１５ｍＬ離心用。逡逑作步驟如下表６。逡逑表６邋ＬＰＳ抗原樣品含糖量測定操作逡逑Ｔａｂｌｅ邋６邋Ｔｈｅ邋ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｏｎ邋ｏｆ邋ｓｕｇａｒ邋ｃｏｎｔｅｎｔ邋ｉｎ邋ＬＰＳ邋ａｎｔｉｇｅｎ邋ｓａｍｐｌｅ逡逑１邐２邐３邐４邐５邐６邐７邐備注逡逑準(zhǔn)逡逑液邋０．０５邐０．１０邐０．２０邐０．３０邐０．４０邐０．６０邐０．８０邐置于冰

圖３邋ＬｐｘＬ／ＬｐｘＭ邋ＰＣＲ鑒定結(jié)果逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３邋ＬｐｘＬ／ＬｐｘＭ邋ＰＣＲ邋ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｒｅｓｕｌｔｓ逡逑疫苗檢驗結(jié)果逡逑１）眼觀檢查：所配制的油佐劑疫苗和鋁膠佐劑疫苗外觀呈乳白色。逡逑）疫苗穩(wěn)定性：制備的大腸桿菌油佐劑滅活疫苗，沒有分層破乳現(xiàn)象，經(jīng)３０００邋ｒｐｍ逡逑１５邋ｍｉｎ，疫苗無分層現(xiàn)象。鋁膠佐劑滅活苗，４°Ｃ取出后振蕩無顏色變化，離心后抗逡逑劑會有分層。逡逑３）疫苗劑型檢測結(jié)果：將研制的油佐劑疫苗滴于蒸餾水表面，油滴呈規(guī)則圖形，不逡逑周擴散，證明油乳劑為油包水型。逡逑）不同佐劑滅活疫苗的無菌檢驗：檢驗結(jié)果表明，三種滅活疫苗的無菌檢驗均符合逡逑。逡逑不同佐劑滅活疫苗的安全性比較結(jié)果逡逑由下表可知，單劑量０．５邋ｍＬ／羽免疫１４日齡健康ＳＰＦ雞，觀察兩周。通過臨床觀察，逡逑爾１７０油佐劑疫苗和Ｍａｒｃ５２油佐劑疫苗接種后１２－２４小時之間，部分雞產(chǎn)生過暫時性逡逑
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S852.61

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本文編號：2609434