發(fā)布時(shí)間：2020-03-29 17:35

【摘要】：本研究首先研究飼糧汞污染(以氯化汞的形式添加)對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能,蛋品質(zhì),主要組織器官損傷,卵泡閉鎖率和血清激素水平的影響,同時(shí)探討飼糧汞污染對(duì)蛋雞肝臟、腎臟和卵巢抗氧化系統(tǒng)的影響以及研究其相關(guān)分子機(jī)制。在體內(nèi)試驗(yàn)基礎(chǔ)上,體外分別構(gòu)建蛋雞卵巢顆粒細(xì)胞模型和雞胚腎細(xì)胞模型,進(jìn)一步研究氯化汞處理對(duì)蛋雞孕酮激素分泌的影響分子機(jī)制和氯化汞誘導(dǎo)雞胚腎細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)PERK-ATF4-CHOP信號(hào)通路參與的細(xì)胞凋亡分子機(jī)制。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:1飼糧汞污染對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響本試驗(yàn)旨在研究飼糧汞污染對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響。選取健康且體重相近的40周齡海蘭褐蛋雞768只,隨機(jī)分成4個(gè)處理組,每組8個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)24只雞。4個(gè)處理組飼糧中汞含量分別為0.28,3.33,9.42,27.24 mg/kg。試驗(yàn)周期為10周,包括1周預(yù)飼期和9周正式期。結(jié)果表明,飼糧汞污染可以顯著降低蛋雞產(chǎn)蛋率(P0.05)和平均蛋重(P0.05),反而顯著提高料蛋比(P0.05),同時(shí)對(duì)蛋雞平均采食量和死淘率無(wú)顯著影響(P0.05)。飼糧汞污染還可以顯著降低哈氏單位(P0.05),蛋白高度(P0.05),蛋殼強(qiáng)度(P0.05)和蛋殼厚度(P0.05),而對(duì)蛋黃顏色無(wú)顯著影響(P0.05)。另外,3.33,9.42和27.24mg/kg汞處理組的蛋黃、蛋白、蛋殼和全蛋中汞沉積量均顯著高于0.28 mg/kg汞處理組(P0.05)。哈氏單位(P0.05)和蛋白高度(P0.01)與蛋白、蛋黃和全蛋中汞沉積量均呈顯著性負(fù)相關(guān)關(guān)系。蛋殼強(qiáng)度(P0.05)和蛋殼厚度(P0.05)與蛋殼和全蛋中汞沉積量亦均呈顯著性負(fù)相關(guān)關(guān)系。2飼糧汞污染對(duì)蛋雞肝臟、腎臟損傷和卵泡閉鎖率的影響本試驗(yàn)旨在研究飼糧汞污染對(duì)蛋雞肝臟和腎臟器官損傷,以及對(duì)卵泡閉鎖率的影響。結(jié)果表明,飼糧汞污染會(huì)造成汞在蛋雞心臟、肺臟、脾臟、肝臟、腎臟、卵巢、肌胃和腺胃內(nèi)沉積,同時(shí)隨著飼糧中汞水平增加,汞沉積量顯著提高(P0.05)。在相同處理組中,汞在腎臟中沉積量最高,肝臟和卵巢中次之。飼糧中汞污染還會(huì)造成蛋雞肝臟和腎臟的組織不同程度損傷。此外,27.24 mg/kg汞處理組的血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)(P0.05)和血清球蛋白(GLB)(P0.05)水平均顯著高于0.28和3.33mg/kg汞處理組。同時(shí),27.24mg/kg汞處理組的血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)水平顯著高于其余各處理組(P0.05)。然而,與0.28 mg/kg汞處理組相比,27.24mg/kg汞處理組的血清中白蛋白(ALB)水平和ALB/GLB均顯著降低(P0.05)。此外,3.33,9.42和27.24 mg/kg汞處理組的血清中尿素氮(BUN)(P0.05),肌酐(CRE)(P0.05)和水平尿酸(UA)(P0.05)水平均顯著高于0.28 mg/kg汞處理組。另外,飼糧汞污染會(huì)顯著提高蛋雞卵泡閉鎖率(P0.05),并且卵巢中汞的沉積量與卵泡閉鎖率呈顯著的正相關(guān)關(guān)系(P0.01)。3飼糧汞污染對(duì)蛋雞肝臟、腎臟和卵巢抗氧化系統(tǒng)的影響本試驗(yàn)旨在研究飼糧汞污染對(duì)蛋雞肝臟、腎臟和卵巢抗氧化系統(tǒng)的影響。結(jié)果表明,飼糧汞污染可以顯著降低蛋雞肝臟、腎臟和卵巢中超氧化物歧化酶(SOD)(P0.05)、過(guò)氧化氫酶(CAT)(P0.05)、谷胱甘肽還原酶(GR)(P0.05)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活力(P0.05),以及谷胱甘肽(GSH)水平(P0.05)。然而,蛋雞肝臟、腎臟和卵巢中丙二醛(MDA)水平均顯著升高(P0.05)。同時(shí),飼糧汞污染可以顯著降低蛋雞肝臟中銅鋅超氧化物歧化酶(CuZnSOD)(P0.05)、CAT(P0.05)、GR(P0.05)和GSH-Px(P0.05)基因表達(dá)水平,以及蛋雞腎臟和卵巢中銅鋅超氧化物歧化酶CuZnSOD(P0.05)、錳超氧化物歧化酶(MnSOD)(P0.05)、CAT(P0.05)、GR(P0.05)和GSH-Px(P0.05)基因表達(dá)水平。飼糧汞污染還可以顯著降低蛋雞肝臟、腎臟和卵巢中轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子2(Nrf2)基因和蛋白表達(dá)(P0.05),反而顯著提高其中胞質(zhì)接頭蛋白(Keapl)基因和蛋白表達(dá)(P0.05)。此外,除了肝臟中錳超氧化物歧化酶(MnSOD)基因以外,其他的抗氧化酶活力與抗氧化酶基因表達(dá)之間均呈現(xiàn)顯著正相關(guān)關(guān)系(P0.05)。蛋雞肝臟、腎臟和卵巢中Nrf2基因表達(dá)與抗氧化酶基因表達(dá)之間亦呈顯著正相關(guān)(P0.05),而Nrf2基因、蛋白表達(dá)與Keapl之間均呈顯著負(fù)相關(guān)(P0.01)。4汞處理對(duì)蛋雞孕酮激素分泌的影響研究本試驗(yàn)旨在研究氯化汞處理對(duì)蛋雞卵巢孕酮(P4)激素分泌的影響研究。體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果表明,飼糧汞污染可以顯著降低卵泡刺激素(FSH)(P0.05)、黃體生成素(LH)(P0.05)和P4激素(P0.05)水平。體外培養(yǎng)卵泡顆粒細(xì)胞研究不同汞劑量、不同處理時(shí)間對(duì)類固醇激素合成酶(StAR)、側(cè)鏈裂解酶(P450scc)和類固醇脫氫酶(3β-HSD),以及環(huán)磷酸腺苷(cAMP)-蛋白激酶A(PKA)通路的影響,進(jìn)一步探討氯化汞處理對(duì)蛋雞P4激素水平影響的分子機(jī)制。體外試驗(yàn)結(jié)果表明,與對(duì)照組相比,2、4和6 μM汞處理會(huì)顯著降低12 h的P4激素水平(P0.05),且4和6uM汞處理會(huì)顯著降低48 h的P4激素水平(P0.05)。與對(duì)照組相比,2、4和6μM汞處理會(huì)顯著降低12和24h的環(huán)磷酸腺苷(cAMP)水平(P0.05)和24h的蛋白激酶A(PKA)水平(P0.05)。同時(shí),與對(duì)照組相比,6μM汞處理會(huì)顯著降低48 h的cAMP水平(P0.05),以及12和48 h的PKA水平(P0.05)。此外,與對(duì)照組相比,2、4和6 μM汞處理還會(huì)顯著降低24和48 h類固醇激素合成調(diào)節(jié)蛋白(StAR)(P0.05)、細(xì)胞色素P450側(cè)鏈裂解酶(P450scc)(P0.05)和類固醇脫氫酶(3β-HSD)基因表達(dá)水平(P0.05)。通過(guò)各指標(biāo)間相關(guān)性分析結(jié)果表明,在12和24h培養(yǎng)時(shí)間,卵巢顆粒細(xì)胞內(nèi)P4、cAMP、PKA、StAR、P450scc和3β-HSD水平之間均呈現(xiàn)顯著正相關(guān)關(guān)系(P0.05)。5汞處理對(duì)雞胚腎細(xì)胞凋亡的影響研究本試驗(yàn)旨在研究氯化汞處理對(duì)雞胚腎臟(CEK)細(xì)胞凋亡的影響。體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果表明,9.42和27.24 mg/kg汞處理組蛋雞的腎臟組織中均出現(xiàn)了不同程度的細(xì)胞凋亡。之后進(jìn)行體外試驗(yàn)進(jìn)一步研究氯化汞誘導(dǎo)蛋雞腎臟發(fā)生細(xì)胞凋亡的分子機(jī)理。體外培養(yǎng)CEK細(xì)胞,設(shè)置4個(gè)處理組:對(duì)照組(0μM汞),5 μM汞處理組、10 μM汞處理組和15 μM汞處理組。同時(shí),應(yīng)用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)抑制劑4-苯基丁酸(4-PBA)處理細(xì)胞探索ERS在氯化汞誘導(dǎo)CEK細(xì)胞凋亡過(guò)程中所起作用,另外設(shè)置4個(gè)處理組:對(duì)照組(0λM汞),4-PBA處理組,15μM汞處理組和15μM汞+4-PBA處理組。試驗(yàn)結(jié)果表明,與對(duì)照組相比,氯化汞處理會(huì)降低CEK細(xì)胞培養(yǎng)24h后的致密程度,還會(huì)顯著增加細(xì)胞核濃縮程度,并且顯著降低CEK細(xì)胞活力(P0.05)。與對(duì)照組相比,氯化汞處理可以顯著增加CEK細(xì)胞凋亡率(P0.05),顯著增加CEK細(xì)胞線粒體膜電位降低百分比(P0.05),并且顯著增加Bax/Bcl-2基因表達(dá)(P0.05)。然而,當(dāng)4-PBA與15μM汞共同處理CEK細(xì)胞后,CEK細(xì)胞活力顯著高于15 μM汞處理組(P0.05);CEK細(xì)胞凋亡率會(huì)顯著低于15μM汞處理組(P0.05);細(xì)胞內(nèi)Bax/Bcl-2基因表達(dá)顯著低于15μM汞處理組(P0.05)。此外,與對(duì)照組相比,氯化汞處理可以顯著提高CEK細(xì)胞內(nèi)GRP78(P0.05)、ATF4(P0.05)和CHOP(P0.05)基因表達(dá)和顯著提高GRP78(P0.05)、ATF4(P0.05)、p-PERK/PERK(P0.05)和CHOP(P0.05)蛋白表達(dá)。然而,當(dāng)4-PBA與15μM汞共同處理CEK細(xì)胞后,CEK細(xì)胞內(nèi)GRP78(P0.05)、ATF4(P0.05)、CHOP(P0.05)基因表達(dá)水平和GRP78(P0.05)、ATF4(P0.05)、p-PERK/PERK(P0.05)和CHOP(P0.05)蛋白表達(dá)水平均顯著低于15μM汞處理組。以上結(jié)果提示:飼糧汞污染顯著降低蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì),造成蛋雞肝臟和腎臟組織結(jié)構(gòu)損傷,并顯著提高卵泡閉鎖率。飼糧汞污染可以通過(guò)抑制Nrf2-Keap1通路抑制下游的抗氧化酶基因表達(dá),顯著降低蛋雞肝臟、腎臟和卵巢中抗氧化酶活力,從而損傷蛋雞肝臟、腎臟和卵巢的抗氧化系統(tǒng)。此外,飼糧汞污染會(huì)顯著降低血清中FSH、LH和P4水平。體外試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),氯化汞可以在時(shí)間和劑量依賴下干擾蛋雞卵巢顆粒細(xì)胞內(nèi)cAMP-PKA通路和StAR、P450scc和3β-HSD關(guān)鍵基因的表達(dá),從而抑制細(xì)胞內(nèi)P4激素的分泌。此外,飼糧汞污染可以誘導(dǎo)蛋雞腎臟發(fā)生細(xì)胞凋亡。體外試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),氯化汞處理會(huì)通過(guò)激活CEK細(xì)胞內(nèi)ERS相關(guān)的PERK-ATF4-CHOP通路,CHOP因子會(huì)增強(qiáng)線粒體中Bax/Bcl-2基因表達(dá)來(lái)誘導(dǎo)CEK細(xì)胞凋亡。
【圖文】：

ｍｇ／ｋｇ邋Ｈｇ邋ｇｒｏｕｐ：邋Ｄ：邋Ｈｅｐａｔｉｃ邋ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ邋ｉｎ邋２７．２４邋ｍｇ／ｋｇ邋Ｈｇ邋ｇｒｏｕｐ．逡逑３．４飼糧中汞污染對(duì)蛋雞腎臟損傷的影響逡逑由圖３－２可知，在０．２８邋ｍｇ／ｋｇ汞處理組中，腎小球和腎小管的組織結(jié)構(gòu)正常。逡逑然而，在３．３３，，邋９．４２和２７．２４邋ｍｇ／ｋｇ汞處理組中，腎小球和腎小管的組織結(jié)構(gòu)均出逡逑現(xiàn)不同程度的損傷。隨著飼糧中汞水平的增加，腎小球濃縮程度越來(lái)越嚴(yán)重，同逡逑時(shí)腎小管越來(lái)越肥大。此外，在９．４２和２７．２４ｍｇ／ｋｇ汞處理組中，腎小管還出現(xiàn)了逡逑空泡化和纖維化的變化。逡逑３２逡逑

ｇｒｏｕｐ；邋Ｄ：邋Ｒｅｎａｌ邋ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ邋ｉｎ邋２７．２４邋ｍｇ／ｋｇ邋Ｈｇ邋ｇｒｏｕｐ．逡逑３．５飼糧中汞污染對(duì)蛋雞卵泡閉鎖率的影響逡逑由圖３－３可知，隨著飼糧中汞水平的增加，卵泡閉鎖率呈先升高之后逐漸平緩，逡逑再升高的趨勢(shì)。與０．２８邋ｍｇ／ｋｇ汞處理組相比，３．３３，邋９．４２和２７．２４邋ｍｇ／ｋｇ汞處理組的逡逑卵泡閉鎖率顯著提高（Ｐ＜0．0５）。此外，卵巢中汞的沉積量與卵泡閉鎖率呈顯著的逡逑正相關(guān)關(guān)系（Ｐ＜０．０１）。逡逑３３逡逑
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S831.5

【參考文獻(xiàn)】

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4 王登強(qiáng);林麗穎;冷旭媚;陳林;;金屬汞對(duì)男性生殖系統(tǒng)的影響[J];中國(guó)工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志;2010年02期

5 李愛(ài);陳雷;胡新武;張亮品;曹雪紅;劉烈炬;劉長(zhǎng)金;;甲基汞誘導(dǎo)海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡及其機(jī)制研究[J];環(huán)境與健康雜志;2008年01期

6 袁繼麗;劉成海;姜哲浩;張悅;劉成;;口服氯化汞對(duì)大鼠腎間質(zhì)纖維化的作用[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào);2006年02期

7 于佳明;徐兆發(fā);徐斌;楊敬華;王家駿;;汞致腎細(xì)胞凋亡的量效關(guān)系研究[J];毒理學(xué)雜志;2005年04期

8 王丹紅,蔡春平,孫華華,吳文唏;進(jìn)口魚(yú)粉汞含量調(diào)查與分析[J];中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志;2005年02期

9 李永華,王五一,楊林生,李海蓉;汞的環(huán)境生物地球化學(xué)研究進(jìn)展[J];地理科學(xué)進(jìn)展;2004年06期

10 于炎湖;飼料安全性問(wèn)題——(4)飼料中重金屬元素污染的來(lái)源、危害及其預(yù)防[J];養(yǎng)殖與飼料;2003年02期

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本文編號(hào)：2606292