【摘要】：豬瘟是一種在豬身上引發(fā)的以高熱及彌散性出血為特征的高度烈性傳染病,臨床病死率高,對養(yǎng)殖業(yè)危害很大。本論文通過生物信息學和分子生物學手段,在已獲取的巨噬細胞應答豬瘟病毒(CSFV,Classical Swine Feve Virus)不同毒力株侵染的轉錄組學數據庫中,分析獲得差異性表達的信號通路相關基因。并建立豬瘟侵染巨噬細胞模型,檢測分析JAK信號通路及血管內皮生長因子A(Vascular endothelial growth factor-A,VEGF-A)等特定細胞因子的應答特征。同時開展聚肌胞抑制CSFV復制的驗證性研究,并進一步討論聚肌胞在JAK2及VEGF-A應答CSFV侵染中的調節(jié)作用。研究結果為深入理解CSFV感染機理及抗病毒治療機制提供了基礎數據。研究工作取得以下結果:(1)對CSFV石門株、C株感染巨噬細胞及對照組的高通量測序數據進行基于基因趨勢表達分析的GO-TREE構建,發(fā)現CSFV石門株感染不僅可以影響細胞遷移、細胞生長、細胞增殖和細胞周期阻滯,還可以改變炎癥反應、NF-κB調控、凋亡調控等特定細胞因子的活性。其中JAK-STAT通路在GO-TREE分析中被辨明是對CSFV石門株侵染應答的顯著性通路。進一步建立CSFV石門株巨噬細胞侵染模型對JAKSTAT家族成員的侵染后應答開展分子生物學檢測,定量PCR結果顯示JAK2及STAT4在巨噬細胞中侵染CSFV石門株后轉錄出現顯著性抑制。(2)差異基因表達分析結果同時表明VEGF-A在感染CSFV石門株的巨噬細胞中高表達。進一步開展分子生物學驗證,實時熒光定量PCR(Quantitative Real Time PCR,qPCR)、Western blot以及激光共聚焦分析結果顯示CSFV石門株侵染巨噬細胞后,VEGF-A的轉錄及蛋白表達水平出現了顯著性上調。(3)對不同濃度聚肌胞及不同時間點處理CSFV石門株侵染的巨噬細胞開展定量PCR檢測分析,結果顯示聚肌胞對CSFV石門株在巨噬細胞中的復制具有顯著性抑制作用,免疫熒光檢測進一步支持了這一結論。GO-TREE分析提示JAK-STAT可能作為聚肌胞的抗病毒靶點,qPCR分析結果顯示,聚肌胞可拮抗CSFV石門株在巨噬細胞中誘導的JAK2以及STAT4抑制,提示聚肌胞可能通過激活JAK-STAT通路來發(fā)揮抗病毒作用。同時研究結果顯示,聚肌胞可抑制CSFV石門株誘導的巨噬細胞VEGF-A的上調表達,提示聚肌胞可能通過抑制病毒復制來緩解CSFV引發(fā)的炎性反應。
【圖文】：

圖 2.1 生物信息分析流程圖勢分析 石門株、CSFV C 株和對照組的巨噬細胞兩兩比較進行Falsediscoveryrate，FDR）作為閾值。基因表達的顯著性ratio 的絕對值≥1 共同決定。顯著識別出 CSFV 石門株和下調的基因[57]。O pathway 分析和功能富集分析、可視化和集成發(fā)現平臺（Database for Annotation，Voveryplatform，DAVID，https://david.ncifcrf.gov/）數據庫中和下調基因，研究基因功能和通路。利用京都基因與基lopediaofGenesandGenomes，KEGG），，在 CSFV 石門株集的代謝途徑或信號轉導途徑。利用基因本體（Gene O

圖 2.2 高通量測序的聚類趨勢分析2.3.3 GO 富集分析為了探討 CSFV 石門株感染相關基因表達變化的可能后果，基于 GO 功能對圖 2.2 中趨勢 3、4、5、6 的基因進行了 GO 富集分析（圖 2.3B)。CSF染引起巨噬細胞基因在一系列生物學過程、分子功能和細胞成分的變化中動。CSFV 石門株感染不僅可以影響細胞遷移、細胞生長、細胞增殖和細，還可以改變炎癥反應、NF-kappaB 調控、凋亡調控、局灶性粘附和整合特定因子的活性。之前的研究表明，CSFV 石門株感染可導致細胞周期停促使其破壞宿主細胞的先天免疫反應，在宿主細胞中增殖[64]。這些異�；罴毎腥� CSFV 石門株后其生理功能受到了顯著的影響。CSFV 改變了巨因調控的穩(wěn)態(tài)，巨噬細胞應對不同毒力的病毒感染有不同的響應機制。病主細胞內基因調控的穩(wěn)態(tài)，宿主細胞也積極準備應對不同毒性的病毒感染
【學位授予單位】：西安電子科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S852.651

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本文編號：2600755