【摘要】：禽白血病(Avian Leukosis,AL)群是指由禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus,ALV)引起的禽類各種可傳播的良性和惡性腫瘤�？梢鹨幌盗信R床病理變化并導(dǎo)致雞群生產(chǎn)性能下降和免疫抑制。禽白血病可分為內(nèi)源性禽白血病(ALV-E)和外源性禽白血病。根據(jù)病毒的基因組結(jié)構(gòu)、染宿主的范圍、血清中和及干擾實(shí)驗(yàn),外源性禽白血病被劃分為5個(gè)亞型:A、B、C、D和J。臨床上較為常見的亞型主要是A、J亞型,J亞型禽白血病是在20世紀(jì)出現(xiàn)的,隨后在全世界流行、爆發(fā),造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失,并引起了人們的重視�，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)有關(guān)禽白血病流行病學(xué)的報(bào)道已經(jīng)很多了,但主要集中在家禽上,關(guān)于野生鳥類感染禽白血病的報(bào)道較少。禽白血病病毒的自然宿主較少,其中雞為該病的主要自然宿主。為了解野生鳥類和活禽市場(chǎng)中禽類感染禽白血病的情況及不同動(dòng)物之間感染情況的差異性,本研究選取東亞-澳大利亞野生鳥類遷徙路線上的江蘇鹽城濕地及鹽城地區(qū)周邊活禽市場(chǎng)作為研究基地,探究江蘇省鹽城地區(qū)野生鳥類與活禽市場(chǎng)中J亞型禽白血病病毒的流行情況。本研究于2015~2016年在我國(guó)江蘇鹽城地區(qū)(野鳥保護(hù)區(qū)、田間、野鳥救助站)進(jìn)行了兩次野生鳥類的新鮮糞便樣品的采集、從市區(qū)及周邊的活禽交易市場(chǎng)采集新鮮家禽糞便樣品或家禽屠宰區(qū)污水、案板等地的棉拭子(環(huán)境樣品)以及從當(dāng)?shù)氐募仪蒺B(yǎng)殖場(chǎng)采集雞鴨鵝的新鮮糞便樣品,共采集樣品2427份,其中,1091份市場(chǎng)活禽糞便樣品,1336份野生鳥類糞便樣品,并對(duì)樣品進(jìn)行了J亞型禽白血病的分子病原學(xué)檢測(cè)及基因序列分析。提取糞便樣品RNA,反轉(zhuǎn)錄后用熒光定量PCR(Real-Time PCR)的方法檢測(cè)ALV-J,檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的樣品,進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增其gp85基因片段,并進(jìn)行克隆測(cè)序和基因序列分析。取RT-PCR檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性及部分陰性糞便樣品上清,分別接種到9日齡SPF雞胚及CEF上,進(jìn)行病毒增殖。CEF連續(xù)傳代3次,培養(yǎng)10d后收獲細(xì)胞及細(xì)胞上清;尿囊腔接種雞胚,傳代3次,收獲雞胚內(nèi)臟及尿囊液。提取細(xì)胞及雞胚內(nèi)臟DNA,進(jìn)行普通PCR檢測(cè);取細(xì)胞上清進(jìn)行ELISA,檢測(cè)P27抗原。熒光定量PCR結(jié)果顯示,1091份活禽市場(chǎng)糞便樣品中,陽(yáng)性樣品22份,陽(yáng)性率為2.02%;1336份野生鳥類糞便樣品中有陽(yáng)性樣品3份,陽(yáng)性率為0.22%。熒光定量PCR檢測(cè)為陽(yáng)性的樣品中,RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,活禽中檢測(cè)到3個(gè)陽(yáng)性樣品,野生鳥類中未檢測(cè)到陽(yáng)性樣品。通過克隆測(cè)序得到3個(gè)長(zhǎng)度為924bp的活禽市場(chǎng)樣品(當(dāng)?shù)赝岭u)的ALV-J gp85基因片段,3個(gè)基因序列的同源性在93.7%~94.7%之間,與13個(gè)國(guó)內(nèi)外ALV參考毒株同源性在87.7%~95.7%之間。普通PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,活禽市場(chǎng)中禽類擴(kuò)增出的3個(gè)ALV-J陽(yáng)性樣品均為熒光定量PCR及RT-PCR檢測(cè)為陽(yáng)性的樣品,經(jīng)克隆測(cè)序得到2個(gè)基因序列,2個(gè)陽(yáng)性樣品的同源性為98.3%,與國(guó)際參考株HPRS-103的同源性為97.8%、98.1%。細(xì)胞上清通過ELISA未檢測(cè)到陽(yáng)性結(jié)果。本調(diào)查使用熒光定量PCR檢測(cè)ALV-J,對(duì)病毒的檢出率較普通PCR擴(kuò)增高,并且普通PCR擴(kuò)增的結(jié)果可以表明其檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度較高。本研究調(diào)查2016年江蘇省鹽城地區(qū)活禽市場(chǎng)與野生鳥類中ALV-J的流行情況,結(jié)果表明活禽市場(chǎng)禽類中存在ALV-J的感染,而野生鳥類中多次復(fù)檢未檢測(cè)到ALV-J的感染,但并不排除野生鳥類中不存在ALV-J的感染。探究了沿東亞-澳大利亞野生鳥類遷徙路線ALV-J的流行情況,為ALV防治提供了重要的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù),給江蘇鹽城地區(qū)ALV的防控提供了一定的參考意義。
【圖文】：

圖 1.1-1ALV 病毒粒子模式圖Fig.1-1 Structure ofALV virus particle毒復(fù)制血病病毒基因組是單股、正鏈、線性 RNA（ssRNA）的二聚

圖 2 活禽市場(chǎng)樣本 RT-PCR 凝膠電泳結(jié)果Figure 2 RT-PCR gel electrophoresis results of live poultry market samM：DL2000 Marker；1～8：PCR 產(chǎn)物；9：陽(yáng)性對(duì)照；10：陰性對(duì)D2000 Marker; 1～8 : PCR amplification fragments; Lane 9 : positive contr
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S857.4

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本文編號(hào)：2598017