發(fā)布時間：2020-03-22 23:40

【摘要】：羊口瘡(ORF)是由副痘病毒屬的傳染性膿皰病毒引起的,該病傳染性強,常呈群發(fā)性流行,在病畜唇鼻等無毛部位隨發(fā)病經(jīng)過依次形成丘疹、水泡、膿皰,最后形成疣狀結痂,產(chǎn)生增生性損傷,羔羊由于其自身免疫系統(tǒng)不健全,尤其易感易發(fā),發(fā)病后采食困難,難以充分攝入營養(yǎng),嚴重影響羔羊生長發(fā)育,最終機體缺乏營養(yǎng)物質,饑餓至死。同一宿主可被羊口瘡病毒反復感染,可繼發(fā)性感染傳染性胸膜肺炎、結膜炎等,繼發(fā)感染使死亡率增加數(shù)倍。且在無癥狀山羊血液中也能夠檢測到ORFV,從受感染的山羊的血液中獲得的ORF病毒具有感染性并且在接種未感染的奶山羊后誘發(fā)典型的傳染性膿皰性皮炎癥狀,表明無癥狀動物也可以是ORFV的攜帶者。嶗山奶山羊作為我國奶山羊的優(yōu)良品種之一,在山東膠東半島地區(qū)大量被養(yǎng)殖,近年羊口瘡在該地區(qū)多家養(yǎng)殖場發(fā)生,給山羊養(yǎng)殖造成巨大經(jīng)濟損失。但未了解該區(qū)羊口瘡的流行現(xiàn)狀,本研究以青島奧特羊場羊只為樣本,進行羊口瘡分子病原學調查,將200只表觀健康的成年孕羊分為未免疫對照組100只,免疫試驗組100只,在免疫前分別采集抗凝血樣品,提取樣品中的DNA,利用本實驗室建立的PCR法檢測羊口瘡病原,進行分子病原學調查;同時用實驗室分離的FX0910毒株在牛睪丸細胞上進行增殖培養(yǎng),用終濃度0.4%的甲醛溶液對病毒液進行滅活;用滅活毒液接種細胞,檢測病毒的滅活效果;制備轉移因子鋁膠鹽佐劑滅活疫苗;用10倍免疫量注射于健康羊來檢測滅活疫苗的安全性;對免疫試驗組羊只間隔14天進行兩次免疫,與未免疫對照組同時,在一免及二免后的第14天采集抗凝血檢測羊口瘡病原;分別分離兩組血清,檢測中和抗體效價;在分娩季,分別采集兩組新生羔羊的臍帶血,檢測羊口瘡病原,測定疫苗免疫的保護效果。研究結果如下:1.免疫試驗組免疫前外周血樣品中羊口瘡病原檢出率為21%,二次免疫后外周血檢出率為4%;未免疫對照組前、后羊口瘡病原檢出率分別為17%、18%;2.免疫組在滅活疫苗免疫前、第一次免疫后和第二次免疫后中和抗體效價分別為1:1.89、1:4.92、1:27.86;3.免疫試驗組臍帶血檢出率為0,未免疫對照組臍帶血檢出率為9.7%。結論:1.通過本研究摸清了所調查羊場羊群羊口瘡病原的帶毒狀況,檢測統(tǒng)計了無臨床癥狀羊只的病原檢出率;2.制備并檢測了羊口瘡轉移因子鋁膠鹽佐劑滅活疫苗,證明滅活疫苗安全可靠;3.用羊口瘡滅活疫苗免疫懷孕山羊后,能顯著提高孕羊體內抗體水平,同時能夠降低羊只帶毒率,表明疫苗具有清除病原、降低羊只病原攜帶率的作用,說明該疫苗能有效的預防和治療羊口瘡;4.免疫組較未免疫組新生羔羊病原檢出率明顯降低,表明免疫羊口瘡滅活疫苗后對病原有清除作用,對新生羔羊具有一定的免疫保護作用。
【圖文】：

反應步驟Reaction steps反應溫度(℃)Reaction temperature反應時間 循環(huán)次數(shù)Reaction time Cycle index1 94 5 min 12 94 30 s 3456 30 s72 35 s3 72 10 min 14 4 Forever.3 檢測統(tǒng)計結果與分析做好檢測結果記錄，統(tǒng)計羊口瘡病原檢出率。.3.1 抗凝血樣品檢測結果將采自青島奧特羊場的表觀正常孕羊的抗凝血樣全部進行羊口瘡病原檢測(P果如圖 2-1 所示 2~12 為被檢測抗凝血樣品)，并與國內不同地區(qū)分離的羊口瘡的細胞毒 PCR 檢測結果進行比較(如圖 2-2 所示)，B2L 基因的擴增目的條帶一條帶大小都是 540bp，，表明樣品檢測結果確為羊口瘡病毒陽性。

檢測統(tǒng)計結果凝血 PCR 檢測的結果進行統(tǒng)計。結果顯示，200 只羊總檢出免疫試驗組兩個組免疫前檢出率分別為 17%、21%，具體情暴發(fā)過羊口瘡病后，康復羊或表觀正常的羊可處于帶毒狀態(tài)體內依舊存在，仍具有暴發(fā)該病的威脅。表 2-1 免疫前樣本病原檢出率統(tǒng)計表Chart 2-1 Statistical table of pathogen detection rate before immuniz未免疫組采 集 數(shù) /只Samples免 疫 組采集數(shù)/只Samples未免疫組陽性數(shù)/只Positivesamples of免疫組陽性數(shù)/只Positivesamples未 免 疫陽 性 檢率%Positive圖 2-2 不同地區(qū)分離羊口瘡病毒擴增細胞毒 B2L 基因 PCR 檢測ig.2-2 Detection results for orf virus from different parts of China of B2LgM: DNAMarker DL500，1 楊凌、2 榆林、3 陰性對照、4 青島、5 石林: DNAMarker DL500,1 Yangling, 2 Yulin, 3 Negative controls, 4 QingdaHengshan
【學位授予單位】：西北農林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S858.27

【參考文獻】

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本文編號：2595800