【摘要】：禽安卡拉病是由Ⅰ群禽腺病毒血清4型(Fowl Adenovirus serotype 4,FAdV-4)引起的一種急性傳染病。1987年,該病在巴基斯坦伊斯蘭共和國的安卡拉(Ankara)地區(qū)首次被報道,因此就被命名為安卡拉病。該病以心包積液和肝臟多灶性壞死為主要病理特征,所以,安卡拉病通常也被稱為心包積水-肝炎綜合癥(Hydropericardium-Hepatitis Syndrome,簡稱為HHS)。近幾年該病正流行于全國各地,對我國養(yǎng)禽業(yè)的健康發(fā)展造成了很嚴(yán)重的影響。為了更好地了解禽安卡拉病在遼寧地區(qū)的分子流行情況,自2016年以來,本實驗室采集了遼寧省沈陽、撫順、鞍山地區(qū)疑似FAdV-4感染的11批次病死家禽和野禽的肝臟病料,對其進行陽性檢測和Hexon基因的遺傳進化分析,試驗內(nèi)容及結(jié)果如下:1.根據(jù)FAdV-4六鄰體蛋白(Hexon)基因設(shè)計特異性引物,對疑似患有安卡拉病的家禽和野禽肝臟組織DNA進行PCR擴增后,均在954 bp處出現(xiàn)目的基因片段。通過與GenBank中的參考毒株序列進行遺傳進化分析,證實了這些家禽和野禽都感染上了FAdV-4。2.對遼寧省鞍山、撫順、沈陽的家禽肝臟病料和森林野生動物園的鷲珠雞肝臟病料按照常規(guī)的方法處理后,接種9日齡SPF雞胚。結(jié)果顯示,當(dāng)雞胚接種7d后解剖均出現(xiàn)生長緩慢、蜷縮等特征。收集SPF雞胚的尿囊液進行血凝試驗,唯有鞍山株SPF雞胚的尿囊液能夠凝集大鼠紅細(xì)胞。3.根據(jù)FAdV-4六鄰體蛋白(Hexon)基因設(shè)計全基因特異性擴增引物,對遼寧省撫順、鞍山、沈陽的家禽肝臟病料和森林野生動物園的鷲珠雞的肝臟病料進行Hexon全基因擴增,結(jié)果顯示,5份病料均在2889 bp處出現(xiàn)目的條帶。本研究課題擴增出的Hexon全基因序列的開放閱讀框長度為2814 bp,約編碼937個氨基酸,并對Hexon全基因進行系統(tǒng)發(fā)育及同源性的分析。本試驗分離出的5株分離毒株相互之間的差異與GenBank上已錄入的國內(nèi)參考毒株之間的差異相同,核苷酸同源性在99.8%-100%之間,與國外各國家的參考毒株的核苷酸同源性在96.9%-99.8%之間;與國內(nèi)參考毒株的氨基酸同源性為99.6%-100%,與國外各國家的參考毒株的氨基酸同源性在96.4%-99.5%之間,說明有很強的保守性。根據(jù)系統(tǒng)發(fā)育樹的結(jié)構(gòu)圖可以看出,5株分離毒株與國內(nèi)的分離毒株都在同一個分支上,而且與國外的印度分離毒株也屬于同一個分支,即與印度的毒株相距最近,而與美國的毒株相距最遠(yuǎn)。4.應(yīng)用DNASTAR生物信息學(xué)軟件對六鄰體蛋白進行抗原表位的分析與預(yù)測,在55-66、162-168、266-275、400-407、560-570、765-774、788-804、874-885和913-919的區(qū)段可能是六鄰體蛋白潛在的抗原優(yōu)勢表位,而發(fā)生氨基酸變異的位點如鷲珠雞(FAdV-4_Shenyang_Acr.*)毒株中的第406位、鞍山(FAdV-4_Anshan_gallus*)毒株中的第773位和第880位都包含在這些可能潛在的抗原優(yōu)勢表位區(qū)域中。通過對Hexon六鄰體全基因的克隆與全基因遺傳進化分析,了解毒株的變異趨勢,對于掌控致病性和毒力都具有非常重要的意義,也為今后深入研討Ⅰ群禽腺病毒的疫苗奠定理論基礎(chǔ),尋找一種相對優(yōu)勢的抗原對于禽腺病毒的診斷也有很重要的意義。
【圖文】：

前言DS）相關(guān)的一類病毒，能從鵝、鴨、雞的體內(nèi)分離而獲得大，其中一部分含有Ⅰ群腺病毒的共同抗原（殷震和劉景華1997）。結(jié)構(gòu)及特點囊膜，病毒粒子呈二十面體結(jié)構(gòu)，直徑在 80-110 nm 之間 60-65 nm 的髓芯，由排列在三角形面上的 252 個殼粒組成形狀。整個病毒粒子含蛋白 87%，含核酸 13%。病毒顆粒，并排列成晶格狀。病毒核酸是單分子、線狀、雙鏈的 D兩端含有 100-140 bp 的末端反向重復(fù)序列（ITR）。一般感對分子質(zhì)量為 20-25×106，G+C 含量為 48%-61%。感染鳥量為 30×106，，G+C 含量為 54%-55%。腺病毒粒子結(jié)構(gòu)如圖匯圖網(wǎng)。

均在 954 bp 的片段處出現(xiàn)明亮的核酸特異性條帶，與預(yù)期大小一致。家禽的 Hexon 基因片段 PCR 擴增結(jié)果如圖2 所示（撫順株命名為撫順 1，撫順市新賓滿族自治縣株命名為撫順 2，下同）；野禽的 Hexon 基因片段 PCR 擴增結(jié)果如圖 3 所示。圖 2 家禽的 Hexon 基因片段 PCR 擴增結(jié)果Fig.2 the PCR amplification result of poultry Hexon gene fragment注：M:DL2000 marker 1:撫順 1 2:撫順 2 3:沈陽 4:鞍山Note: M:DL2000 marker 1.Fushun1 2:Fushun2 3:Shenyang 4:Anshan圖 3 野禽的 Hexon 基因片段 PCR 擴增結(jié)果Fig.3 the PCR amplification result of wild fowl Hexon gene fragment注：M:DL2000 marker 1:鷲珠雞 2:天鵝 3:斑頭雁 4:鴕鳥 5:鴿子 6:白孔雀 7:藍(lán)孔雀Note: M:DL2000 marker 1:Acryllium vulturinum 2: Cygnus 3:Anser indicus 4: Struthio camelus5: Columba 6:white peacock 7:blue peahe
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S852.65

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前9條

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本文編號：2593921