【摘要】：吞噬作用是一種對(duì)抗微生物病原體的重要機(jī)制,但許多細(xì)菌均有抗吞噬作用。利用透射電鏡和激光共聚焦顯微鏡結(jié)合細(xì)胞生物學(xué)技術(shù),對(duì)黑腹果蠅Drosophila melanogaster S2細(xì)胞吞噬熱滅活大腸埃希菌(heat inactivated Escherichia coli,HIEC)和熱滅活金黃葡萄球菌(heat inactivated Staphylococcus aureus,HISA)的作用進(jìn)行了研究。結(jié)果表明:S2細(xì)胞能夠在接種后1 d內(nèi)有效清除HIEC,但不能清除HISA;經(jīng)聚肽糖(PG)或脂多糖(LPS)激活的S2細(xì)胞同樣不能有效地清除HISA,HISA能夠在S2細(xì)胞內(nèi)至少存活4 d。在接種細(xì)胞酸性指示劑(p Hrodo)標(biāo)記的細(xì)菌1h后,HIEC處于酸化環(huán)境中,而HISA沒(méi)有;檢測(cè)S2細(xì)胞的吞噬百分率顯示S2細(xì)胞吞入活細(xì)菌與滅活細(xì)菌的敏感度沒(méi)有顯著差異。PG處理后的S2細(xì)胞防御素(defensin)與抗真菌肽(drosomycin)均顯著上調(diào)表達(dá),但仍無(wú)法消化HISA。結(jié)果證實(shí):滅活金黃葡萄球菌表面具有抑制吞噬作用中消化步驟的成分,而滅活大腸埃希菌沒(méi)有。研究揭示了在S2細(xì)胞對(duì)抗革蘭氏陽(yáng)性菌時(shí),吞噬作用在清除該類(lèi)病原體時(shí)所起到的重要作用以及金黃葡萄球菌抑制消化過(guò)程從而抵御細(xì)胞吞噬的策略。
【圖文】：

2細(xì)胞吞噬熱滅活大腸桿菌HIEC1h后，胞內(nèi)可觀察到HIEC發(fā)出的綠色熒光（圖3A）；吞噬發(fā)生1d后，S2細(xì)胞內(nèi)觀察不到綠色熒光粒子（圖3B）；表明HIEC已經(jīng)被S2細(xì)胞清除。同樣處理下，熱滅活金黃葡萄球菌HISA沒(méi)有被S2細(xì)胞清除。由圖3C和圖3D可知，HISA被吞噬后，，被S2細(xì)胞內(nèi)化到細(xì)胞內(nèi)繼續(xù)存在。由此可知，在S2細(xì)胞接種滅活菌后，HIEC與HISA均被S2細(xì)胞吞入，但HIEC被S2細(xì)胞清除，而HISA則沒(méi)有被清除。2.3流式細(xì)胞儀檢測(cè)S2細(xì)胞對(duì)HIEC或HISA的吞噬作用流式細(xì)胞儀的檢測(cè)結(jié)果由圖4可知：接種1h后，吞入了至少1個(gè)HIEC粒子的S2細(xì)胞在所有S2圖1透射電鏡觀察黑腹果蠅S2細(xì)胞對(duì)HIEC或HISA的吞噬作用Figure1TransmissionelectronmicroscopyofphagocytosisofHIECorHISAbyS2cellsA.S2細(xì)胞吞噬HIEC（孵育后1h）；B.S2細(xì)胞吞噬HIEC（孵育后1d）；C.S2細(xì)胞吞噬HISA（孵育后1h）；D.S2細(xì)胞吞噬HISA（孵育后1d）。箭頭指示胞內(nèi)的HISA。圖2透射電鏡觀察黑腹果蠅S2細(xì)胞對(duì)HISA的吞噬作用Figure2TransmissionelectronmicroscopyofphagocytosisofHISAbyS2cellsA.HISA；B.S2細(xì)胞吞噬HISA（孵育后1d）；C.S2細(xì)胞吞噬HISA（孵育后2d）；D.S2細(xì)胞吞噬HISA（孵育后3d）；E.S2細(xì)胞吞噬HISA（孵育后4d）；F.LPS激活S2細(xì)胞吞噬HISA（孵育后4d）；G.PG激活S2細(xì)胞吞噬HISA；H.PG激活S2細(xì)胞（孵育后4d），胞內(nèi)HISA被內(nèi)化。箭頭指示胞內(nèi)的HISA。圖3激光共聚焦顯微鏡觀察黑腹果蠅S2細(xì)胞對(duì)FITC標(biāo)記的HIEC或HISA的吞噬作用Figure3ConfocalmicroscopyofphagocytosisofFITC-labeledHIECorHISAbyS2cellsA.S2細(xì)胞吞噬HIEC（孵育后1h）；B.S2細(xì)胞吞噬HIEC（孵育后1d）；C.S2細(xì)胞吞噬HISA（孵育后1h）；D.S2細(xì)胞吞噬HISA（孵育后1d）。綠色熒光表示胞內(nèi)滅活菌（HIEC或HISA），藍(lán)色熒光表示細(xì)胞核，紅色熒

由此可知，在S2細(xì)胞接種滅活菌后，HIEC與HISA均被S2細(xì)胞吞入，但HIEC被S2細(xì)胞清除，而HISA則沒(méi)有被清除。2.3流式細(xì)胞儀檢測(cè)S2細(xì)胞對(duì)HIEC或HISA的吞噬作用流式細(xì)胞儀的檢測(cè)結(jié)果由圖4可知：接種1h后，吞入了至少1個(gè)HIEC粒子的S2細(xì)胞在所有S2圖1透射電鏡觀察黑腹果蠅S2細(xì)胞對(duì)HIEC或HISA的吞噬作用Figure1TransmissionelectronmicroscopyofphagocytosisofHIECorHISAbyS2cellsA.S2細(xì)胞吞噬HIEC（孵育后1h）；B.S2細(xì)胞吞噬HIEC（孵育后1d）；C.S2細(xì)胞吞噬HISA（孵育后1h）；D.S2細(xì)胞吞噬HISA（孵育后1d）。箭頭指示胞內(nèi)的HISA。圖2透射電鏡觀察黑腹果蠅S2細(xì)胞對(duì)HISA的吞噬作用Figure2TransmissionelectronmicroscopyofphagocytosisofHISAbyS2cellsA.HISA；B.S2細(xì)胞吞噬HISA（孵育后1d）；C.S2細(xì)胞吞噬HISA（孵育后2d）；D.S2細(xì)胞吞噬HISA（孵育后3d）；E.S2細(xì)胞吞噬HISA（孵育后4d）；F.LPS激活S2細(xì)胞吞噬HISA（孵育后4d）；G.PG激活S2細(xì)胞吞噬HISA；H.PG激活S2細(xì)胞（孵育后4d），胞內(nèi)HISA被內(nèi)化。箭頭指示胞內(nèi)的HISA。圖3激光共聚焦顯微鏡觀察黑腹果蠅S2細(xì)胞對(duì)FITC標(biāo)記的HIEC或HISA的吞噬作用Figure3ConfocalmicroscopyofphagocytosisofFITC-labeledHIECorHISAbyS2cellsA.S2細(xì)胞吞噬HIEC（孵育后1h）；B.S2細(xì)胞吞噬HIEC（孵育后1d）；C.S2細(xì)胞吞噬HISA（孵育后1h）；D.S2細(xì)胞吞噬HISA（孵育后1d）。綠色熒光表示胞內(nèi)滅活菌（HIEC或HISA），藍(lán)色熒光表示細(xì)胞核，紅色熒光表示肌動(dòng)蛋白。×100。384

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