【摘要】：Musclin是一種具有調(diào)節(jié)肌肉生長(zhǎng)發(fā)育和代謝功能的生物活性因子,由Nishizawa等于2004年通過(guò)信號(hào)序列示蹤技術(shù)從小鼠骨骼肌中發(fā)現(xiàn)。對(duì)于M Musclin基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制的研究,特別是綿羊Musclin基因啟動(dòng)子區(qū)各種重要順式作用元件的功能研究,尚未見(jiàn)詳盡系統(tǒng)的研究報(bào)道。本課題組在前期研究中,已經(jīng)通過(guò)生物信息學(xué)分析在綿羊Musclin基因啟動(dòng)子區(qū)發(fā)現(xiàn)了一些潛在的重要元件。因此,本試驗(yàn)旨在進(jìn)一步通過(guò)突變分析和EMSA技術(shù)研究這些順式作用元件的作用,以為揭示Musclin基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。本試驗(yàn)在課題組前期已經(jīng)克隆的綿羊Musclin基因啟動(dòng)子序列的基礎(chǔ)上，采用將所要研究的順式作用元件序列突變?yōu)槊盖形稽c(diǎn)的方法,分別設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增,并進(jìn)一步以EGFP為報(bào)告基因，，構(gòu)建了一系列肌肉相關(guān)潛在元件(包括E-box、GA-box、MEF2、 MEF3、FoxO、HMTB、SMAD、VTBP)突變的Musclin基因啟動(dòng)子表達(dá)載體MUSCLINproXM-EGFP。將構(gòu)建好的元件突變載體分別轉(zhuǎn)染小鼠C2C12成肌細(xì)胞系,熒光顯微鏡觀察表明元件突變后對(duì)該啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性存在不同程度的影響。EGFP的熒光定量PCR結(jié)果顯示：E-box系列(E1～E8)中,除了E2和E8元件突變后使Musclin啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性上調(diào)外,其它E-box突變均使Musclin啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性下調(diào);其它元件中,除了GA-box突變使Musclin啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性下調(diào)外,MEF2、MEF3、FoxO、HMTB. SMAD和VTBP元件突變均使啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性上調(diào)。為了對(duì)這些元件進(jìn)行更加深入的探究,選取了E-box、FoxO、VTBP、SMAD、HMTB、 MEF3元件進(jìn)行了EMSA試驗(yàn),結(jié)果表明：在綿羊肌肉組織提取的核蛋白中,確實(shí)存在能夠與E1, E2, E5, E8, FoxO, HMTB, SMAD這些順式作用元件相結(jié)合的反式作用因子,進(jìn)一步確證了這些元件在Musclin基因啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的重要作用。
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S826

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2547296