【摘要】：本研究通過運用LPS誘導(dǎo)斷奶仔豬構(gòu)建免疫應(yīng)激模型,探究斷奶仔豬應(yīng)激狀態(tài)下機體炎癥、細胞增殖和凋亡進程,從多角度分析仔豬應(yīng)激過程的免疫機能及狀態(tài),進一步解析和理解仔豬免疫調(diào)節(jié)機制。本試驗研究中50頭斷奶仔豬隨機均分成LPS組和對照組,LPS組每天腹腔注射LPS(100μg/kg bw)一次,對照組注射等體積生理鹽水,試驗持續(xù)13天。在試驗第1、4、7、10和13天,每組各選5頭仔豬宰殺、采血、稱重及收集脾臟組織,全自動血液分析儀檢測血常規(guī),Elisa法檢測血清促炎性細胞因子水平,觀察分析仔豬大體形態(tài)特征和脾臟指數(shù)。取一份脾臟組織于4%多聚甲醛中固定,經(jīng)脫水、透明、包埋、切片程序后制成5μm厚切片,HE染色后觀察脾臟組織形態(tài),IHC和光密度半定量分析技術(shù)探討IL-1β、IL-6、TNF-α、Skp2、P27~(Kip1)、Caspase-3蛋白分布表達,TUNELPOD染色后觀察凋亡細胞分布規(guī)律。另取一份脾臟組織液氮速凍后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱,QRT-PCR技術(shù)檢測Skp2及P27~(Kip1)轉(zhuǎn)錄水平。本試驗中LPS誘導(dǎo)斷奶仔豬應(yīng)激模型中主要結(jié)果如下:①試驗初期LPS誘導(dǎo)斷奶仔豬嘔吐腹瀉、食欲降低、體溫上升,中期癥狀改善,后期癥狀消失;②LPS應(yīng)激后斷奶仔豬脾重及指數(shù)明顯增大,尤其是第10天;③LPS應(yīng)激后會外周血細胞成分發(fā)生變化,細胞數(shù)量和比例發(fā)生顯著變化;④LPS誘導(dǎo)斷奶仔豬的第4、7、10天,脾臟組織生發(fā)中心明顯、脾小結(jié)增多、PALS增厚;⑤LPS應(yīng)激后促炎性細胞因子濃度發(fā)生顯著變化,第1天血清和脾臟中IL-1β、IL-6表達水平上升,第4、7、10天血清和脾臟IL-1β、IL-6、TNF-α表達水平下降;⑥LPS誘導(dǎo)斷奶仔豬第4、7、10天,Skp2陽性細胞數(shù)量增多、密集分布于脾小結(jié)、邊緣區(qū)、PALS,主要是淋巴細胞;⑦LPS誘導(dǎo)斷奶仔豬第7、10天,脾臟Skp2轉(zhuǎn)錄翻譯活動增強、P27~(Kip1)轉(zhuǎn)錄翻譯活動減弱,兩者表達呈負相關(guān);⑧LPS誘導(dǎo)斷奶仔豬第4、7天,脾臟Caspase-3蛋白表水平下降、凋亡細胞數(shù)量減少,細胞凋亡進程受阻。上述結(jié)果表明斷奶仔豬脾臟可通過自身免疫系統(tǒng)抵御LPS侵襲,維持脾臟正常組織結(jié)構(gòu)、確保生理功能運行。主要體現(xiàn):促炎性細胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α合成分泌受到抑制,限制脾臟炎癥強度避免組織損傷;Skp2轉(zhuǎn)錄翻譯水平升高,參與脾臟淋巴細胞增殖分化,增強機體免疫;凋亡蛋白Caspase-3活性抑制,脾臟細胞凋亡進程受阻。
【圖文】：

圖 1-2-1 LPS 結(jié)構(gòu)模式圖Fig.1-2-1 The molecular structure model of LPS與哺乳動物細胞一樣，，一層膜（囊膜）所包裹著細菌表面、可維持微生物形狀完整性。以革蘭氏陰性菌為例，流感嗜血桿菌、大腸桿菌、腸道沙門氏菌、霍亂弧菌布氏桿菌、銅綠假單胞菌、鸚鵡熱衣原體的囊膜是由雙層不對稱的組織膜所構(gòu)成，

圖2-2-1 LPS誘導(dǎo)斷奶仔豬臨床癥狀Fig.2-2-1 LPS induced clinical symptoms of weaned piglets注：A，試驗第1天對照組仔豬臨床癥狀；B、C，試驗第1天LPS組仔豬臨床癥狀；D、F，試驗第4天；E，試驗第7天；G、H，試驗第10天；I，LPS重復(fù)注射對仔豬體溫的影響，同一日齡對照組與LPS組進行差異性比較，*表示差異顯著P<0.05，**表示差異極顯著P<0.01。Note: A, clinical symptoms of weaned piglets treated by saline on day 1; B, C, clinical symptoms of
【學(xué)位授予單位】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S858.28

【參考文獻】

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本文編號：2544492