發(fā)布時(shí)間：2019-09-07 10:34

【摘要】：野生食肉類(lèi)動(dòng)物,如野狼、野狗、赤狐、浣熊等是狂犬病病毒的自然攜帶者或傳播者。防止野生食肉類(lèi)動(dòng)物的狂犬病在人和家養(yǎng)動(dòng)物之間的擴(kuò)散是防制狂犬病的重要環(huán)節(jié)。與家養(yǎng)動(dòng)物注射用疫苗不同,野生食肉類(lèi)動(dòng)物口服疫苗由抗原、佐劑、誘餌三個(gè)部分組成。本研究的目的是(1)用細(xì)菌脂多糖、氫氧化鋅、枸杞多糖、甘露低聚糖篩選適合口服疫苗用的免疫佐劑,并驗(yàn)證其增強(qiáng)免疫反應(yīng)的效果;(2)用牛肉粉、雞肉粉、魚(yú)肉粉、奶粉、血粉為主料制備口服疫苗用誘餌,并檢測(cè)誘餌的采食性以及包埋效應(yīng)。研究方法:采用同步接毒法在BHK-21細(xì)胞上增殖狂犬病病毒SRV9弱毒疫苗株,通過(guò)半數(shù)熒光灶形成量(FFD50)試驗(yàn)對(duì)培養(yǎng)病毒滴度進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)正交試驗(yàn)方法對(duì)細(xì)菌脂多糖、氫氧化鋅、枸杞多糖、甘露低聚糖進(jìn)行配方篩選,用昆明小鼠做佐劑的免疫效力實(shí)驗(yàn)。篩選出的最佳復(fù)合佐劑與狂犬病病毒SRV9弱毒疫苗混勻后灌喂實(shí)驗(yàn)組小鼠,人用狂犬病疫苗腹腔3次注射、單一病毒2次口服以及單一病毒3次口服的小鼠分別作為對(duì)照組。于免疫后14天(DAI 14)、DAI 21、DAI 28以及DAI 35分別采集實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠血液,檢測(cè)血清IgG。用熒光抗體病毒中和試驗(yàn)(FAVN)對(duì)DAI 35的實(shí)驗(yàn)組小鼠血清抗體進(jìn)行中和試驗(yàn)。用正交試驗(yàn)的方法優(yōu)選誘餌配方,用理化方法檢測(cè)其采食性和包埋效應(yīng)。研究結(jié)果:(1)增殖、獲得的狂犬病SRV9弱毒滴度(FFD50)為10-5.42/0.1 mL;(2)優(yōu)選的復(fù)合佐劑組方是細(xì)菌脂多糖100μg、氫氧化鋅0.8 mg、枸杞多糖50 mg以及甘露低聚糖10mg。在DAI 28,實(shí)驗(yàn)組小鼠的血清IgG和腸道SIgA水平均值分別為3239μg/m L和1.56 ng/mL;(3)在DAI 35,復(fù)合佐劑+狂犬病病毒組誘導(dǎo)的體液免疫效果優(yōu)于單一病毒2次口服實(shí)驗(yàn)組和單一病毒3次口服實(shí)驗(yàn)組,血清抗體平均效價(jià)為0.63 IU/mL,已達(dá)到保護(hù)水平;(4)制備出五種誘餌組方,即魚(yú)肉味、血粉味、牛肉味、雞肉味、奶粉味誘餌組方;(5)在誘餌的采食試驗(yàn)中,貓、犬、狼、狐貍對(duì)魚(yú)肉味誘餌的采食率最高,其次是血粉味和奶味誘餌;(6)誘餌在-80℃、-20℃可長(zhǎng)期保存,在4℃、7 d條件下保存完好,即誘餌質(zhì)地適中,不變形、無(wú)著染包埋疫苗滲漏。在37℃、12 h條件下,魚(yú)肉味和血粉味誘餌保持相對(duì)穩(wěn)定,即質(zhì)地適中、無(wú)包埋物滲漏,而牛肉粉、雞肉粉、奶粉型誘餌出現(xiàn)變形、滲漏。小結(jié):本文篩選出野生食肉類(lèi)動(dòng)物口服疫苗所必需的復(fù)合免疫佐劑。免疫佐劑+狂犬病病毒可增加狂犬病病毒的免疫效應(yīng)。本文制備了牛肉味、雞肉味、魚(yú)肉味、血粉味和奶油味五種口服疫苗用誘餌,并確定了誘餌的采食性及包埋效應(yīng)。本文所研究的復(fù)合免疫佐劑和誘餌為進(jìn)一步研發(fā)重組減毒狂犬病口服疫苗提供了必要的技術(shù)支撐。
【學(xué)位授予單位】：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S859.797

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