【摘要】：犢牛腹瀉是指犢牛在出生7h到12d內(nèi)所發(fā)生的一種急性腹瀉,一般由腸道內(nèi)細菌、病毒、寄生蟲等傳染性因素或者營養(yǎng)不良、飼養(yǎng)環(huán)境惡劣等非傳染性因素造成,嚴重時會引發(fā)脫水,造成犢牛大量死亡。犢牛腹瀉是全球奶牛、肉牛養(yǎng)殖過程中最常見的問題,往往帶來巨大的經(jīng)濟損失,嚴重制約著養(yǎng)牛行業(yè)的發(fā)展。在各種導(dǎo)致犢牛腹瀉的因素中,產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC)是最主要的病原菌,也是牛發(fā)生腸毒血癥的病原菌之一。目前,多通過接種疫苗來預(yù)防此疾病的發(fā)生。然而,由于大腸桿菌血清型繁多,且不同區(qū)域流行情況不同,一些商品化疫苗往往不能得到很好的免疫效果,因此,新疫苗的研發(fā)一直是預(yù)防該病的重點。菌影是近年來的一種新型疫苗。它是通過基因滅活的方式將細菌變成一種無胞質(zhì)內(nèi)容物,但保留完整的細菌菌體及外膜上各種抗原結(jié)構(gòu)的無活性空胞體。由于菌影疫苗的免疫原性高,制備簡單,保存運輸方便,同時還具有免疫佐劑性質(zhì),能夠增強免疫應(yīng)答等諸多優(yōu)點,使其成為國內(nèi)外研究人員的研究熱點。本研究以黑龍江部分牧場死亡腹瀉犢牛的病料為研究材料,從中分離出致病性大腸桿菌,并對其所攜帶的毒力因子進行檢測,并對致病性大腸桿菌進行分型。結(jié)果顯示,該地區(qū)致犢牛腹瀉的主要大腸桿菌病原型為產(chǎn)腸毒素大腸桿菌。在此基礎(chǔ)上,我們篩選出一株疫苗候選菌株,制備成產(chǎn)腸毒素大腸桿菌菌影疫苗。通過動物試驗對產(chǎn)腸毒素大腸桿菌菌影疫苗的免疫效果進行檢測。將30只小鼠隨機分為三組,每組10只:菌影疫苗組、滅活疫苗組和對照組。疫苗的接種方式為腹腔注射,免疫劑量為1×108 CFU,每兩周免疫一次,共免疫三次。每次免疫一周后采取血清,利用間接ELISA方法檢測免疫小鼠血清抗體水平。疫苗三免一周后對免疫小鼠進行腹腔攻毒,觀察并記錄攻毒一周內(nèi)小鼠的死亡情況。通過疫苗對小鼠的保護率以及小鼠抗體水平的檢測評價疫苗的免疫效果。結(jié)果表明,菌影疫苗對感染小鼠有較高的保護率,且能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生較高的抗體水平。綜合本研究結(jié)果表明,產(chǎn)腸毒素大腸桿菌菌影疫苗具有良好的安全性,并具有很好的免疫原性,可激發(fā)動物體產(chǎn)生較好的免疫應(yīng)答,可作為預(yù)防產(chǎn)腸毒素大腸桿菌導(dǎo)致的犢牛腹瀉的新型候選疫苗。本研究為產(chǎn)腸毒素大腸桿菌疫苗的制備提供了基礎(chǔ)。
【圖文】：

驗結(jié)果腸桿菌的鑒定結(jié)果規(guī)鑒別培養(yǎng)基分離培養(yǎng)方法分離得到的 63 株疑似大腸桿菌進行 PCR 擴增鑒定期大小相符的片段，約 947 bp（圖 3-1）。將 PCR 擴增產(chǎn)物送至吉林庫美生物科序，，測序結(jié)果與 GenBank 上的序列進行 BLAST 比對分析，同源性達 99%以上株為大腸桿菌。

DL2000 DNA Marker；1-6：K88 基因的 PCR 產(chǎn)物L(fēng)2000 DNA Marker; 1-6: PCR product of K88 gene圖 3-2 K88 基因的 PCR 鑒定結(jié)果Fig.3-2 Identification of K88 gene by PCRDL2000 DNA Marker；1-3：K99 基因的 PCR 產(chǎn)物L(fēng)2000 DNA Marker; 1-3: PCR product of K99 gene圖 3-3 K99 基因的 PCR 鑒定結(jié)果Fig.3-3 Identification of K99 gene by PCR
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S852.4

【參考文獻】

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本文編號：2530392