【摘要】：為探究臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(UC-MSCs)調(diào)控乳腺上皮細(xì)胞(BMECs)乳蛋白合成的可能作用機(jī)制,實(shí)驗(yàn)共分為8組,實(shí)驗(yàn)組利用Transwell小室雙層共培養(yǎng)UC-MSCs和BMECs,BMECs單培養(yǎng)為對(duì)照組,每組又分為不處理組和IGF-ΙR抑制劑AG1024、PI3K抑制劑LY294002不同處理組,ELISA檢測(cè)上清IGF-Ι和β-酪蛋白(CSN2)、κ-酪蛋白(CSN3)含量,實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定CSN2、CSN3、P13K、AKT、m TOR m RNA表達(dá)。結(jié)果表明:實(shí)驗(yàn)組各項(xiàng)指標(biāo)均極顯著高于對(duì)照組(P0.01);AG1024處理顯著下調(diào)各基因表達(dá)(P0.05),極顯著降低CSN2、CSN3蛋白含量(P0.01);LY294002處理極顯著抑制PI3K m RNA表達(dá)(P0.01),顯著降低CSN2、CSN3 m RNA表達(dá)和蛋白含量;AG1024和LY294002共同處理極顯著下調(diào)P13K、AKT、m TOR m RNA表達(dá)(P0.01),顯著下調(diào)CSN2、CSN3 m RNA表達(dá)(P0.05),極顯著降低CSN2、CSN3蛋白含量(P0.01)。綜上,UC-MSCs能夠通過(guò)IGF-Ι介導(dǎo)PI3K/Akt/m TOR信號(hào)通路,上調(diào)BMECs主要乳蛋白基因表達(dá),促進(jìn)乳蛋白合成。
【圖文】：

-57-2017年第53卷第5期ScienceandTechnology·科學(xué)技術(shù)MSCs+AG組極顯著高于BMECs+AG組（P<0.01），BMECs/UC-MSCs+LY組極顯著高于BMECs+LY組（P<0.01），BMECs/UC-MSCs+AG+LY組顯著高于BMECs+AG+LY組（P<0.05）（圖2）。2.2RT-qPCR鑒定結(jié)果表2數(shù)據(jù)顯示，各樣本RNA濃度均在200～400ng/μL，OD260/280均在1.8～2.2，表明總RNA純度較高，并且有足量的RNA用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；各基因RT-qPCR擴(kuò)增圖譜顯示（圖3），Ct值是反映體系中熒光信號(hào)達(dá)到閥值時(shí)經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)，熔解曲線顯示（圖3），基線平穩(wěn)，表明PCR產(chǎn)物單一，能準(zhǔn)確定量目的基因mRNA的表達(dá)量。2.3AG1024和LY294002對(duì)乳蛋白合成和信號(hào)通路關(guān)鍵基因表達(dá)的影響定量結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組PI3K、AKT、mTORmRNA表達(dá)豐度均極顯著高于對(duì)照組（P<0.01），AG1024和LY294002處理組均極顯著下調(diào)各項(xiàng)基因表達(dá)豐度（P<0.01）（圖4）；各組細(xì)胞中CSN2、CSN3mRNA的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組最高，顯著高于對(duì)照組（P<0.05），AG1024和LY294002單獨(dú)處理組均顯著低于處理前（P<0.05），BMECs+AG+LY組較對(duì)照組相比極顯著下調(diào)（P<0.01），BMECs/UC-MSCs+AG+LY組較實(shí)驗(yàn)組相比顯著下調(diào)（P<0.05），不同處理方案的實(shí)驗(yàn)組均顯著高于同處理的對(duì)照組（P<0.05）（圖5）。3討論前期實(shí)驗(yàn)已證實(shí)，UC-MSCs、BMECs均可分泌IGF-Ι，無(wú)血清共培養(yǎng)條件下，，UC-MSCs能夠顯著提高BMECs中IGF-Ι、IGF-ΙRmRNA表達(dá)。研究結(jié)果表明，UC-MSCs可分泌IGF-I等多度（濃ngml/）Cncoetnratino（ngml/）BaCBbABMECsBMECs/UC-MSCsBMECs+AGBMECs/UCMSCs+AG30.00025.00020.00015.00010.0005.0000.000度濃ng/m,L柱形圖字母相同表示差異不顯著（P>0.05），不同小寫(xiě)字母間表

-57-2017年第53卷第5期ScienceandTechnology·科學(xué)技術(shù)MSCs+AG組極顯著高于BMECs+AG組（P<0.01），BMECs/UC-MSCs+LY組極顯著高于BMECs+LY組（P<0.01），BMECs/UC-MSCs+AG+LY組顯著高于BMECs+AG+LY組（P<0.05）（圖2）。2.2RT-qPCR鑒定結(jié)果表2數(shù)據(jù)顯示，各樣本RNA濃度均在200～400ng/μL，OD260/280均在1.8～2.2，表明總RNA純度較高，并且有足量的RNA用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；各基因RT-qPCR擴(kuò)增圖譜顯示（圖3），Ct值是反映體系中熒光信號(hào)達(dá)到閥值時(shí)經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)，熔解曲線顯示（圖3），基線平穩(wěn)，表明PCR產(chǎn)物單一，能準(zhǔn)確定量目的基因mRNA的表達(dá)量。2.3AG1024和LY294002對(duì)乳蛋白合成和信號(hào)通路關(guān)鍵基因表達(dá)的影響定量結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組PI3K、AKT、mTORmRNA表達(dá)豐度均極顯著高于對(duì)照組（P<0.01），AG1024和LY294002處理組均極顯著下調(diào)各項(xiàng)基因表達(dá)豐度（P<0.01）（圖4）；各組細(xì)胞中CSN2、CSN3mRNA的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組最高，顯著高于對(duì)照組（P<0.05），AG1024和LY294002單獨(dú)處理組均顯著低于處理前（P<0.05），BMECs+AG+LY組較對(duì)照組相比極顯著下調(diào)（P<0.01），BMECs/UC-MSCs+AG+LY組較實(shí)驗(yàn)組相比顯著下調(diào)（P<0.05），不同處理方案的實(shí)驗(yàn)組均顯著高于同處理的對(duì)照組（P<0.05）（圖5）。3討論前期實(shí)驗(yàn)已證實(shí)，UC-MSCs、BMECs均可分泌IGF-Ι，無(wú)血清共培養(yǎng)條件下，UC-MSCs能夠顯著提高BMECs中IGF-Ι、IGF-ΙRmRNA表達(dá)。研究結(jié)果表明，UC-MSCs可分泌IGF-I等多度（濃ngml/）Cncoetnratino（ngml/）BaCBbABMECsBMECs/UC-MSCsBMECs+AGBMECs/UCMSCs+AG30.00025.00020.00015.00010.0005.0000.000度濃ng/m,L柱形圖字母相同表示差異不顯著（P>0.05），不同小寫(xiě)字母間表
【作者單位】： 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院新疆肉乳用草食動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31560645) 自治區(qū)科技人才培養(yǎng)項(xiàng)目(GN2015YX014) 中國(guó)博士后基金委 2015年度新疆研究生科研創(chuàng)新項(xiàng)目(XJGRI2015083)
【分類號(hào)】：S852.2

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本文編號(hào)：2528735