【摘要】：為分析致林麝肺炎的病原菌,從發(fā)病死亡的林麝肺臟進(jìn)行細(xì)菌分離,對(duì)分離所得細(xì)菌進(jìn)行微生物學(xué)和生化特性鑒定及動(dòng)物試驗(yàn)。細(xì)菌分離結(jié)果顯示,病死林麝肺臟主要為2種不同菌落形態(tài)的細(xì)菌,經(jīng)挑純后,測(cè)定其16 S rRNA序列,發(fā)現(xiàn)2株細(xì)菌均為大腸埃希菌,菌株1與Escherichia coli O104:H4序列同源性均為100%,菌株2與Escherichia coli O_(78)序列同源性為100%。用2株菌進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)2株大腸埃希菌對(duì)小鼠的致死率均為75%;藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明,頭孢類(頭孢唑啉、頭孢曲松)和單環(huán)β內(nèi)酰胺類(氨曲南)對(duì)2株林麝肺部致病性大腸埃希菌均敏感;氨基糖苷類(鏈霉素)對(duì)其均中度敏感;對(duì)其他類別抗生素均呈現(xiàn)不同程度的耐藥性。
【圖文】：

箱內(nèi)培養(yǎng)２４ｈ后，觀察菌落種類及相對(duì)數(shù)量，記錄菌落特征。挑取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭染色并鏡檢，，觀察疑似病原菌菌體的形態(tài)，并劃線接種于普通瓊脂、麥康凱瓊脂和鮮血瓊脂，３７℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)２４ｈ后，觀察并記錄菌落特征，同時(shí)挑取單菌落進(jìn)行革蘭染色鏡檢，觀察其菌體形態(tài)。將分離培養(yǎng)得到的典型菌落，挑取單菌落劃線接種于三糖鐵瓊脂斜面，進(jìn)行純化培養(yǎng)，取單菌落接于于ＬＢ液體培養(yǎng)基，３７℃、２００ｒ／ｍｉｎ搖床進(jìn)行過(guò)夜培養(yǎng)增菌，保菌備用。１．２．２．２生化試驗(yàn)將菌液接種于普通培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基，３７℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)２４ｈ后，挑取單菌落分別進(jìn)行糖發(fā)酵試驗(yàn)（葡萄糖、蔗糖、芽糖、乳糖）、ＭＲ試驗(yàn)、ＶＰ試驗(yàn)、靛基質(zhì)試驗(yàn)、檸檬酸鹽利用試驗(yàn)，每個(gè)試驗(yàn)分別重復(fù)３次。根據(jù)《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》判定試驗(yàn)結(jié)果［７］。１．２．２．３１６ＳｒＲＮＡＰＣＲ鑒定�。保恚叹�，沸水加熱１０ｍｉｎ，冷卻１５ｍｉｎ，１２０００ｒ／ｍｉｎ離心２ｍｉｎ，取上清液作為ＰＣＲ反應(yīng)的ＤＮＡ模板。依據(jù)羅燕等報(bào)道的用１６ＳｒＲＮＡＰＣＲ的通用引物２７Ｆ和１４９２Ｒ進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增［８］。ＰＣＲ產(chǎn)物送西安擎科澤西生物科技有限責(zé)任公司進(jìn)行測(cè)序。１．２．３動(dòng)物試驗(yàn)將試驗(yàn)小鼠分為３組，對(duì)照組（Ｃ組）、試驗(yàn)組（Ｇ１）和試驗(yàn)組（Ｇ２）。試驗(yàn)前禁食、禁水２４ｈ。Ｇ１組小鼠腹腔注射菌株１菌液１ｍＬ／只（約含細(xì)菌２×１０９ＣＦＵ）。Ｇ２組小鼠同方法同劑量注射菌株２菌液。Ｃ組小鼠同方法注射生理鹽水１ｍＬ／只。攻菌后，各組分籠

表１分離菌株的生理生化鑒定結(jié)果Ｔａｂｌｅ１Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆ２ｉｓｏｌａｔｅｓｉｎｍｕｓｋｄｅｅｒ菌株編號(hào)Ｓｔｒａｉｎｎｕｍｂｅｒ糖發(fā)酵試驗(yàn)Ｐｅｎｔａｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｔｅｓｔ葡萄糖ＧＬＵ蔗糖ＳＡＣ麥芽糖ＭＡＬ乳糖ＬＡＣＭＲ試驗(yàn)ＭＲＶＰ試驗(yàn)ＶＰ靛基質(zhì)試驗(yàn)Ｉｎｄｏｌｅ檸檬酸鹽利用試驗(yàn)Ｃｉｔｒａｔｅ１＋＋＋＋＋－＋－２＋＋＋＋＋－＋－注：糖發(fā)酵試驗(yàn)：“＋”表示產(chǎn)酸產(chǎn)氣；“－”表示不發(fā)酵。其他試驗(yàn)：“＋”表示陽(yáng)性；“－”表示陰性。Ｎｏｔｅ：Ｉｎｐｅｎｔａｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｔｅｓｔ，“＋”ｓｔａｎｄｓｆｏｒｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｇａｓａｎｄａｃｉｄ；“－”ｓｔａｎｄｓｆｏｒｎｏｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ．Ｉｎｏｔｈｅｒｔｅｓｔｓ，“＋”ｓｔａｎｄｓｆｏｒｐｏｓｉｔｉｖｅ；ａｎｄ“－”ｓｔａｎｄｓｆｏｒｎｅｇａｔｉｖｅ．Ｍ．ＤＮＡ標(biāo)準(zhǔn)ＤＬ２０００；１、２．菌株１；３．陰性對(duì)照；４、５．菌株２Ｍ．ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ２０００；１，２．Ｓｔｒａｉｎ１；３．Ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；４，５．Ｓｔｒａｉｎ２圖２分離菌株的１６ＳｒＲＮＡＰＣＲ產(chǎn)物電泳結(jié)果Ｆｉｇ．２Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆ１６ＳｒＲＮＡＰＣＲｒｅｓｕｌｔｓｏｆｉｓｏｌａｔｅｄｓｔｒａｉｎｓ將所測(cè)得的基因序列與ＧｅｎＢａｎｋ中已有的序列進(jìn)行比對(duì)，選取同源性高的菌株并結(jié)合菌株的生理生化特性對(duì)所測(cè)菌株進(jìn)行鑒定。菌株１
【作者單位】： 西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;
【分類號(hào)】：S858.94

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本文編號(hào)：2527997