【摘要】：長期以來,脂肪組織一直被認(rèn)為是僅供能量貯備的終末分化器官。然而,隨著瘦素、脂肪源性的腫瘤壞死因子-α、脂聯(lián)素和抵抗素等的發(fā)現(xiàn),有學(xué)者提出脂肪組織是一個內(nèi)分泌器官。在過去的十幾年里,脂肪組織的分泌功能及其作為內(nèi)分泌器官在機(jī)體的許多生理和病理過程中的作用已倍受關(guān)注。因此,作為脂質(zhì)中心和能量代謝樞紐的脂滴,也越來越受到人們的關(guān)注。在脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)以及肌肉細(xì)胞等許多組織細(xì)胞中都有脂滴的存在。脂肪細(xì)胞與肝細(xì)胞內(nèi)的脂滴是能量儲存的重要場所,腎上腺皮質(zhì)內(nèi)的脂滴供給甾體激素合成需要的原料,而巨噬細(xì)胞內(nèi)的脂滴可能在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。這提示我們,脂滴在不同的細(xì)胞內(nèi)功能方面也存在差別。本課題組其他幾項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn):分娩期山羊及小鼠宮頸中都含有脂肪細(xì)胞,且能夠分泌影響分娩期子宮頸成熟和分娩的前列腺素E2(PGE2),同時還在分娩期小鼠宮頸中發(fā)現(xiàn)分娩期脂肪細(xì)胞內(nèi)脂滴體積變大,數(shù)量變多。分娩期宮頸脂肪細(xì)胞中脂滴的這一變化是否與分娩期激素水平變化有關(guān),就目前關(guān)于分娩期子宮頸中脂肪細(xì)胞脂滴變化原因方面來看國內(nèi)外尚未有此類報道。因此本實(shí)驗(yàn)的目的就是初步驗(yàn)證與生殖相關(guān)激素對脂肪細(xì)胞增殖及脂滴形成的影響,以期能揭示在分娩期宮頸中脂肪細(xì)胞的來源與脂滴變化的原因。本實(shí)驗(yàn)以3T3-L1小鼠成纖維細(xì)胞系為研究對象,將3T3-L1小鼠成纖維細(xì)胞的增殖及分化作為主要研究內(nèi)容。對3T3-L1小鼠成纖維細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)、凍存及復(fù)蘇。將在生長對數(shù)期的細(xì)胞以每孔4000~5000水平接入96孔板,12 h細(xì)胞貼壁后加入含不同摩爾濃度(10 nm/L、20 nm/L、40 nm/L、80 nm/L)孕酮、米非司酮、孕酮+米非司酮、雌激素、地塞米松的5%FBS DMEM培養(yǎng)基或無FBS DMEM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)12 h、24 h、48 h,用MTT法、在490 nm光度值下檢測孕酮、米非司酮、孕酮+米非司酮、雌激素、地塞米松對3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果顯示在12 h和24 h時,5%FBS組和無FBS組的孕酮組、米非司酮組的各濃度組均起促進(jìn)作用,且成劑量依賴性。在12 h和24 h時,5%FBS組和無FBS組的孕酮+米非司酮組的10 nm/L、20 nm/L組均起促進(jìn)作用;5%FBS組和無FBS組的孕酮+米非司酮組的40 nm/L、80 nm/L濃度組在12 h、24 h和48 h時都呈現(xiàn)強(qiáng)烈的抑制作用。在12 h和24 h時,5%FBS組的雌激素組作用不明顯,但在48 h時也呈現(xiàn)抑制作用;在12 h和24 h時,無FBS組的雌激素組各濃度組均起促進(jìn)作用,但在48 h時也呈現(xiàn)抑制作用;地塞米松不論是5%FBS組還是無FBS組在12 h、24 h、48 h時都呈現(xiàn)抑制作用,且無劑量依賴性。同時通過5%FBS組和無FBS組之間的對比發(fā)現(xiàn),各激素在無FBS時作用發(fā)揮較明顯。以上這些結(jié)果表明:FBS在細(xì)胞生長過程中起著重要的作用;孕酮、米非司酮促進(jìn)3T3-L1前脂肪細(xì)胞的生長,使其提前退出生長對數(shù)期轉(zhuǎn)入衰退期,而在48 h顯示抑制作用;孕酮與其拮抗劑米非司酮共同作用時低劑量可促進(jìn)3T3-L1前脂肪細(xì)胞的生長,高劑量抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞的生長;雌激素和地塞米松抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞的生長。采用經(jīng)典雞尾酒誘導(dǎo)法對3T3-L1前脂肪細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化,在誘導(dǎo)分化同時加入不同摩爾濃度(10 nm/L、20 nm/L、40 nm/L、80 nm/L)孕酮、米非司酮、孕酮+米非司酮、雌激素、地塞米松,在分化的2 d、4 d、6 d用油紅O染色在倒置顯微鏡下進(jìn)行拍攝觀察,結(jié)果顯示,隨著時間的延長,加FBS組與無FBS組相比,其細(xì)胞數(shù)和脂滴數(shù)均比無FBS組多,表明FBS在細(xì)胞的生長和分化過程中都是重要的營養(yǎng)因素。與陰性5%FBS組和無FBS組對照組相比,隨著時間的延長,孕酮、雌激素、地塞米松組脂滴量逐漸增多,促進(jìn)3T3-L1細(xì)胞分化;孕酮和米非司酮共同作用組、米非司酮組脂滴量較少,抑制3T3-L1細(xì)胞分化。
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【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2477064