【摘要】：內(nèi)脂素(Visfatin)是一種脂肪細(xì)胞因子。研究發(fā)現(xiàn),Visfatin與糖尿病、肥胖、炎癥以及代謝綜合征有著緊密的聯(lián)系,其與炎癥反應(yīng)的相關(guān)研究已成為一個(gè)新的熱點(diǎn),而p38信號(hào)通路作為MAPK通路里的一個(gè)亞型,是炎癥反應(yīng)中的一個(gè)重要參與者。本研究用LPS刺激構(gòu)建免疫應(yīng)激引起的炎癥模型,通過(guò)觀察Visfatin對(duì)細(xì)胞活性和相關(guān)炎癥因子的影響,Visfatin和p38信號(hào)通路之間的關(guān)系,以明確Visfatin在參與炎癥反應(yīng)時(shí)的作用及途徑,為探尋Visfatin在治療炎癥疾病方面提供新的思路。具體研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:1 Visfatin和LPS對(duì)RAW264.7細(xì)胞形態(tài)和活力的影響MTT試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),隨著Visfatin和LPS濃度的改變,RAW264.7細(xì)胞形態(tài)、數(shù)量和活力均發(fā)生變化。當(dāng)Visfatin濃度達(dá)到200 ng/m L,細(xì)胞數(shù)量明顯增加,以圓形細(xì)胞為主,細(xì)胞聚集生長(zhǎng),而且細(xì)胞活力達(dá)到峰值(P0.01);Visfatin濃度超過(guò)200 ng/m L時(shí),細(xì)胞數(shù)量明顯減少,許多細(xì)胞體積變大,細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)空泡,細(xì)胞活力開(kāi)始下降。當(dāng)LPS的濃度達(dá)到10 ug/m L時(shí),細(xì)胞偽足增多,許多細(xì)胞體積變大,細(xì)胞出現(xiàn)空泡,部分細(xì)胞破裂,細(xì)胞的活力最強(qiáng)(P0.05);繼續(xù)加大LPS的劑量,細(xì)胞中空泡更為明顯,破裂的細(xì)胞也顯著增多,細(xì)胞的活力顯著下降;在50 ug/m L時(shí)細(xì)胞活力已經(jīng)小于對(duì)照組的細(xì)胞活力,說(shuō)明高劑量的Visfatin和LPS對(duì)RAW264.7細(xì)胞有一定的毒性作用。2不同組RAW264.7細(xì)胞內(nèi)IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的表達(dá)ELISA結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,Visfatin的加入可以顯著上調(diào)IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α(P0.05)的表達(dá);在LPS組中,IL-1β、IL-10、TNF-α的表達(dá)與比對(duì)照組相比有明顯增加(P0.05);而與LPS組相比,在Visfatin+LPS組中IL-1β、IL-10、TNF-α的表達(dá)顯著下降(P0.05)。3不同組大鼠肝臟中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的表達(dá)體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果顯示,和生理組相比,Visfatin和LPS組中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的表達(dá)均顯著升高(P0.01);與LPS組相比,Visfatin+LPS組中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α卻顯著下降(P0.01);其中肝臟中IL-1β、IL-10、TNF-α的表達(dá)規(guī)律和細(xì)胞試驗(yàn)中的結(jié)果一致。4不同處理組大鼠肝臟內(nèi)髓過(guò)氧化物酶的表達(dá)免疫組化結(jié)果顯示,MPO陽(yáng)性產(chǎn)物呈棕褐色,細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中均有分布。肝臟中分布廣泛,主要位于肝臟門管區(qū)附近。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明,與生理鹽水組相比,visfatin組的MPO顯著減少(P0.05),而LPS組肝臟中MPO略為減少,差異不顯著(P0.05),而和LPS組相比,在visfatin+LPS組肝臟中的MPO卻顯著減少(P0.05)。結(jié)果表明visfatin可以減少肝臟中MPO的表達(dá),而在LPS刺激后,visfatin更是減少了MPO的表達(dá)。5 Visfatin對(duì)p38信號(hào)通路的影響添加p38的抑制劑SB203580之后,與單獨(dú)加入Visfatin相比,IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α均發(fā)生了顯著下調(diào)(P0.01),結(jié)果表明Visfatin是通過(guò)p38信號(hào)通路來(lái)調(diào)節(jié)IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的表達(dá)的。Western Blot試驗(yàn)結(jié)果顯示,與PBS組相比,Vifatin組中p38的表達(dá)水平顯著升高(P0.05);與LPS組相比,Visfatin+LPS組的p38水平顯著升高(P0.05)。而在觀察P-p38的表達(dá)時(shí)發(fā)現(xiàn),與PBS組相比,Visfatin組中的P-p38的表達(dá)顯著下降(P0.05);與LPS組相比,Visfatin+LPS組的P-p38水平顯著下降(P0.05)。結(jié)果表明Visfatin可能是通過(guò)上調(diào)p38和下調(diào)P-p38的表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)機(jī)體的炎癥反應(yīng)的。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.3

【參考文獻(xiàn)】

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2 萬(wàn)強(qiáng);崔小冰;賈鈺華;周鳳華;趙曉山;孫學(xué)剛;楊靜華;;黃連素通過(guò)ERK1/2通路降低內(nèi)臟脂肪素誘導(dǎo)HUVEC分泌TNF-α和IL-6的研究[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2014年14期

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2 姜文英;妊娠期糖尿病患者分娩前后visfatin變化以及與胰島素抵抗相關(guān)研究[D];浙江大學(xué);2012年

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本文編號(hào)：2465260