【摘要】：為探究禽流感病毒(AIV)M2蛋白對細胞自噬的影響,本研究構(gòu)建了pEGFP-LC3和pCAF-M2重組質(zhì)粒,并采用脂質(zhì)體將這兩種重組表達質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細胞或Hela細胞中,同時以單獨轉(zhuǎn)染這兩種重組質(zhì)粒的細胞作為對照組,利用間接免疫熒光和westernblot的方法檢測細胞自噬體及自噬流情況。自噬體檢測結(jié)果表明,AIVM2蛋白能夠誘導(dǎo)轉(zhuǎn)染細胞內(nèi)自噬體積累。通過LC3-IIturnover試驗、mRFP-GFP-LC3雙熒光指示系統(tǒng)以及pEGFP-LC3與LAMP1的共定位檢測進一步證明,M2蛋白通過阻斷自噬體與溶酶體融合,抑制溶酶體對自噬體的降解從而誘導(dǎo)自噬體積累。本研究揭示AIVM2蛋白對細胞自噬的發(fā)生具有重要作用,為深入研究自噬在A型流感病毒復(fù)制中的調(diào)節(jié)作用奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to investigate the effect of avian influenza virus (AIV) M2 protein on autophagy, recombinant plasmids of pEGFP-LC3 and pCAF-M2 were constructed and co-transfected into 293T cells or Hela cells by lipofectamine. At the same time, the autophagy and autophagy were detected by indirect immunofluorescence and westernblot in cells transfected with these two recombinant plasmids as control group. Autophagy assay showed that AIVM2 protein could induce the accumulation of autophagy in transfected cells. LC3-IIturnover test, mRFP-GFP-LC3 double fluorescence indicator system and co-localization of pEGFP-LC3 and LAMP1 further demonstrated that M2 protein could block the fusion of autophagy and lysosome. Inhibition of lysosome degradation of autophagy and induction of autophagy accumulation. This study reveals that AIVM2 protein plays an important role in the occurrence of autophagy and lays a foundation for further study on the regulation of autophagy in the replication of influenza A virus.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所農(nóng)業(yè)部動物流感重點實驗室/獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點實驗室;
【基金】：國際合作項目(2014DFR31260) 國家重點研發(fā)計劃(2016YFD0500800)
【分類號】：S852.65

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 程杏安;秦湘靜;蔣旭紅;Sammy ZHENG;劉展眉;劉向東;;水稻和昆蟲細胞自噬期間自噬體發(fā)生的細胞學(xué)機理[J];中國農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年05期

2 郭旭光;夏勇;馬越云;郝曉柯;;肺上皮細胞自噬體在結(jié)核分枝桿菌感染中保護作用的分子機制[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2011年21期

3 ;[J];;年期

相關(guān)會議論文 前5條

1 于勝波;宮瑾;遲彥艷;張健飛;鄭楠;隋鴻錦;;Aβ引起大鼠海馬自噬體異常及其軸突運輸障礙[A];中國解剖學(xué)會2011年年會論文文摘匯編[C];2011年

2 郭旭光;夏勇;馬越云;郝曉柯;;自噬體在結(jié)核分枝桿菌感染上皮細胞中保護作用的分子機制[A];中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)年會——2011（第十二次全國呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會議）論文匯編[C];2011年

3 晏向華;;體外重建用于研究參與自噬體形成的功能蛋白的Cell-free System[A];第六次全國飼料營養(yǎng)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

4 樸英杰;陳英;路艷蒙;李佩英;喬東訪;傅文玉;劉連璞;;自噬體與脂褐素相互關(guān)系的透射電鏡觀察[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

5 包勇;姜曉筱;楊永華;;hsp70介導(dǎo)自噬體中Vps34的SUMO化[A];2013醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十三屆全國腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2013年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 武彥威;線蟲肌管素磷酸酶MTM-3調(diào)控自噬體成熟的機制研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 楊軍;Curcumin增強阿爾茨海默病自噬體的軸突轉(zhuǎn)運[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

2 楊建;自噬體—溶酶體系統(tǒng)與2型糖尿病關(guān)系的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2009年

3 郭亞娟;AP1蛋白和反面高爾基體在自噬體形成中的重要作用[D];浙江大學(xué);2011年

，

本文編號：2435079