【摘要】：菌蛻(Bacterial ghosts)是一種只含有細(xì)菌內(nèi)、外膜結(jié)構(gòu)的細(xì)菌空殼,可作為新型疫苗和傳遞載體。本研究通過(guò)3種方式制備禽致病性大腸桿菌(Avian pathogenicity Escherichia coli,APEC)分離株DE17的菌蛻,評(píng)價(jià)不同的菌蛻制備方法。結(jié)果表明,利用噬菌體Phi X174的裂解基因E構(gòu)建的溶菌質(zhì)粒pBV220-E制備DE17菌蛻,對(duì)DE17菌株裂解率可達(dá)99.9%,掃描電鏡觀測(cè)結(jié)果表明,在DE17兩端或中部形成可見的跨膜孔道,呈現(xiàn)典型的菌蛻結(jié)構(gòu)。利用合成的細(xì)胞穿透肽MAP(KLALKLALKALKAALKLA)作用于DE17制備菌蛻,結(jié)果表明,10μmol/L的MAP可實(shí)現(xiàn)對(duì)OD_(600)=0.1的DE17完全滅活,掃描電鏡雖未看到明顯的跨膜孔道,但細(xì)菌的膜結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)溝壑狀,而構(gòu)建的可表達(dá)MAP的溶菌質(zhì)粒pBV220-MAP并不能實(shí)現(xiàn)對(duì)DE17的裂解作用。本研究通過(guò)比較分析不同APEC菌蛻的制備方式,為進(jìn)一步研究菌蛻疫苗和提高菌蛻疫苗的生物安全性提供參考。
[Abstract]:Bacterial slough (Bacterial ghosts) is a kind of bacterial shell containing only internal and outer membrane structure, which can be used as a new vaccine and delivery carrier. The purpose of this study was to prepare the DE17 slough of avian pathogenic Escherichia coli (Avian pathogenicity Escherichia coli,APEC) strain by three methods and evaluate the different preparation methods. The results showed that the lysogenic plasmid pBV220-E constructed from the lytic gene E of phage Phi X174 was used to prepare DE17 slough. The cleavage rate of DE17 strain could reach 99.9%. The results of scanning electron microscope showed that transmembrane channels could be formed at the two ends or the middle of DE17. A typical mycelial slough structure is presented. The cell penetrating peptide (MAP (KLALKLALKALKAALKLA) was used in the preparation of DE17. The results showed that 10 渭 mol/L MAP could completely inactivate the DE17 of OD_ (600) = 0.1, and no obvious transmembrane pore was observed under SEM. However, the membrane structure of bacteria was gully, and the lysogenic plasmid pBV220-MAP, which could express MAP, could not realize the cleavage of DE17. In this study, the preparation methods of different APEC slough were compared and analyzed in order to provide a reference for further research on the microbial slough vaccine and the improvement of the biological safety of the mycelium slough vaccine.
【作者單位】： 西南大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院;中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所;揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院江蘇省人畜共患病學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：上海市科技興農(nóng)重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目(No.2015HNG1-9) 國(guó)家自然科學(xué)基金(No.31370045) 江蘇省人獸共患病學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目(No.R1510)資助~~
【分類號(hào)】：S859.797

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本文編號(hào)：2360049