【摘要】：羽色性狀是禽類重要的經(jīng)濟性狀,在育種上也是品種(系)選育的遺傳標記,在確定品種純度和親緣關(guān)系方面有一定用途。研究表明刺鼠信號蛋白基因(agouti signaling protein gene, ASIP)和酪氨酸酶相關(guān)蛋白-1(Tyrosinase related protein-1, TYRP1)的變異與畜禽的毛(羽)色性狀相關(guān),是毛(羽)色遺傳的重要候選基因。本研究以浙東白鵝、皖西白鵝白羽、皖西白鵝花羽、獅頭鵝白羽和獅頭鵝灰羽群體為試驗材料,選取ASIP和TYRP1基因為鵝羽色性狀相關(guān)的候選基因,開展了鵝ASIP和TYRP1基因的核酸序列克隆、基因結(jié)構(gòu)組成、組織表達譜分析及基因組序列單核苷酸多態(tài)性(SNP)檢測等相關(guān)研究。獲得的主要研究結(jié)果如下：1.采用比較基因組技術(shù)克隆獲得了鵝ASIP基因完整的cDNA和基因組DNA序列。擴增獲得的cDNA序列長461bp(登錄號：KP404626),包含38 bp的5’-端非編碼區(qū)序列,390 bp的編碼區(qū)(ORF)序列和20 bp的3’-端非編碼區(qū)序列。其中ORF可編碼130個氨基酸的蛋白,預(yù)測蛋白分子量(MW)為14.88 kDa,等電點(pI)為9.73�；蚪M序列(登錄號：KP404625)長為6176 bp,由3個外顯子和2個內(nèi)含子組成。多序列對位比對和系統(tǒng)進化樹分析結(jié)果表明,鵝ASIP基因在脊椎動物,尤其在鳥類中高度保守；半定量RT-PCR分析結(jié)果顯示：鵝ASIP基因在眼球、背皮、腹皮、毛囊和腳蹼中特異表達,而在心臟、肝臟、脾臟、腎臟、大腦、腺胃和肌肉組織中未檢測到表達,且背皮表達量顯著低于腹皮的表達量；通過直接測序方法在鵝ASIP基因的基因組序列上共檢測到45個SNP位點和3個插入／缺失突變,c.3758GA和c.4599CT位點分別可以被限制性內(nèi)切酶Hha1和HindⅢ識別,均可產(chǎn)生3種基因型。群體分型結(jié)果顯示：對于c.3758GA位點而言,在皖西白鵝白羽、皖西白鵝花羽和獅頭鵝白羽群體中G等位基因占優(yōu)勢,獅頭鵝灰羽群體中等位基因A略占優(yōu)勢；對于c.4599CT位點而言,在所有群體中C等位基因占優(yōu)勢。2.通過比較基因組技術(shù)克隆測序獲得了鵝TYRP1基因完整的cDNA序列和基因組DNA全長序列。擴增獲得的cDNA序列長1866bp(登錄號：KR080365),包含141 bp的5’-端非編碼區(qū)序列,1611 bp的編碼區(qū)(ORF)序列和114 bp的3’-端非編碼區(qū)序列。其中ORF可編碼536個氨基酸,預(yù)測MW為60.66 kDa, pI為5.68。基因組DNA序列長為10331bp(登錄號：KR080366),由7個外顯子和6個內(nèi)含子組成。多序列對位比對和系統(tǒng)進化樹分析結(jié)果表明,鵝TYRP1基因與同屬于鳥類的雞、鴨、日本鵪鶉、斑鳥草雀和火雞有較近的系統(tǒng)進化關(guān)系；半定量RT-PCR分析結(jié)果顯示：鵝TYRP1基因在眼球、背皮、腹皮和毛囊黑色素沉積組織中有較高的表達量,在腳蹼、大腦、肌肉和腺胃組織中表達量較低,而在心臟、肝臟、脾臟、腎臟組織中未檢測到基因的表達。同樣,鵝TYRP1基因在背皮中的表達量顯著低于腹皮的表達量；通過直接測序在鵝TYRP1基因組序列上共檢測到20個SNP位點和3個插入\缺失突變,其中c.6290AG位點可以被限制性內(nèi)切酶HinfI識別可產(chǎn)生3種基因型。PCR-RFLP基因分型表明,A等位基因均在皖西白鵝白羽、皖西白鵝花羽、獅頭鵝灰羽和獅頭鵝白羽四個群體中占優(yōu)勢。以上研究結(jié)果的獲得將為鵝ASIP和TYRP1兩基因在鵝羽毛發(fā)育過程中的作用研究提供基礎(chǔ)。
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【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S835;Q78

【參考文獻】

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本文編號：2319140