發(fā)布時間：2018-11-08 11:55

【摘要】：呼吸道粘液可黏附吸入的有害氣體、粉塵和病原體,通過上皮纖毛的擺動,將有害物質排出體外,對維持呼吸道的健康至關重要。粘液分泌過多是多種呼吸道疾病的共同特征。冬季豬舍內氨氣濃度較高,不僅影響豬的生長性能,還可能誘發(fā)呼吸道疾病。本研究首先采集健康豬的氣管及右肺上葉,通過組織切片染色觀察了豬呼吸道上皮的主要細胞類型(杯狀細胞、基細胞和克拉拉細胞)和粘液在氣管和支氣管的分布規(guī)律。在此基礎上進行氨氣刺激試驗,選取7周齡健康仔豬12頭,隨機分為4組(NC組,D4組,D8組,D12組),每組3頭,人工模擬濃度為56mg/m3的氨氣環(huán)境,NC組為對照組,不刺激,D4、D8、D12組分別連續(xù)刺激4天、8天、12天,每天刺激8小時。刺激結束后采集各組仔豬的右肺上葉,進行切片染色,觀察氨氣刺激對仔豬呼吸道粘液分泌的影響;同時采集左肺下葉提取RNA,對與粘液分泌和炎癥相關基因的表達量進行了檢測。具體結果如下:1.豬呼吸道主要上皮細胞的分布規(guī)律分別對基細胞和克拉拉細胞的標記蛋白K14和SCGB1A1進行免疫組化,證明具有分化潛能的基細胞和克拉拉細胞分布在豬的呼吸道上皮,在氣管上皮的含量比較豐富;對杯狀細胞的標記蛋白MUC5AC進行免疫組化,證明分泌粘液的杯狀細胞廣泛分布在豬的呼吸道上皮。2.氨氣刺激對仔豬呼吸道粘液分泌的影響AB-PAS染色發(fā)現隨著呼吸道管徑的變小,呼吸道粘液的含量逐漸減少至消失。對試驗仔豬管徑一致的呼吸道進行AB-PAS染色,發(fā)現呼吸道上皮粘液含量隨氨氣刺激時間的延長而增加,刺激12天后,呼吸道上皮粘液含量顯著高于對照組(P0.05);免疫組化試驗發(fā)現氨氣刺激后仔豬呼吸道上皮粘蛋白MUC5AC的含量增加。3.氨氣刺激對呼吸道主要上皮細胞含量及相關因子表達的影響(1)對基細胞的分子標記K5、K14和TP63的含量進行檢測,免疫熒光試驗發(fā)現氨氣刺激后仔豬呼吸道上皮K14的含量高于對照組;Q-PCR結果顯示,與對照組相比,氨氣刺激后仔豬肺組織中K5、K14、TP63的表達量都有增加的趨勢。(2)對克拉拉細胞的標記蛋白SCGB1A1進行免疫組化,發(fā)現氨氣刺激前后仔豬的呼吸道上皮都存在少量的克拉拉細胞;Q-PCR結果顯示氨氣刺激12天后肺組織中SCGB1A1的表達量顯著低于對照組(P0.05)。(3)對具有分化能力的Ⅱ型肺泡細胞的標記基因ABCA3和與呼吸道粘液分泌相關基因S100A9、AQP5和EGFR進行Q-PCR檢測,結果顯示氨氣刺激后仔豬肺組織中ABCA3的表達量顯著高于對照組(P0.05);與NC組相比,氨氣刺激12天后S100A9的表達量顯著升高(P0.05);AQP5的表達量在氨氣刺激4天后有下降的趨勢;EGFR的表達量在氨氣刺激8天后有升高的趨勢。結論:杯狀細胞、基細胞和克拉拉細胞廣泛分布在豬的呼吸道上皮,隨著呼吸道管徑的減小,粘液分泌逐漸減少至消失。氨氣刺激導致仔豬呼吸道上皮粘液增多,杯狀細胞增生,具有分化潛能的基細胞、Ⅱ型肺泡細胞含量增多,克拉拉細胞含量下降,與炎癥和粘液分泌相關因子的表達量發(fā)生變化。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：華中農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S858.28

【參考文獻】

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本文編號：2318430