【摘要】：輪狀病毒(Rotavirus,RV)屬于呼腸孤病毒科,輪狀病毒屬,是引起幼畜病毒性腸炎、腹瀉的的主要病原之一,對我國養(yǎng)豬業(yè)危害巨大,神經(jīng)節(jié)苷酯GM3是其主要受體之一。為了探討食淀粉乳桿菌(Lactobacillus amylovorus)在抗豬輪狀病毒(Procine Rotavirus,PRV)作用中GM3的調(diào)節(jié)機制,本研究分別完成了食淀粉乳桿菌體外抗RV能力分析;食淀粉乳桿菌體內(nèi)對RV感染小鼠乳鼠的相關(guān)效應和乳鼠空腸神經(jīng)節(jié)苷脂GM3變化規(guī)律等兩方面研究,旨在闡明食淀粉乳桿菌抗RV部分機制。本研究分為體外和動物體內(nèi)兩個部分。體外實驗以IPEC-J2細胞為細胞平臺、MTT法為檢驗方法分析食淀粉乳桿菌體外抗RV能力;體內(nèi)實驗選擇中國昆明鼠乳鼠作為實驗動物,檢測食淀粉乳桿菌體內(nèi)對RV感染小鼠乳鼠的相關(guān)效應,進一步檢測了乳鼠空腸神經(jīng)節(jié)苷脂GM3變化規(guī)律和上述效應相關(guān)性。一、體外試驗部分。主要包括食淀粉乳桿菌上清液抗RV能力穩(wěn)定性研究和益生菌共培養(yǎng)上清液抗RV能力測定兩個方面:1.食淀粉乳桿菌上清液抗RV能力穩(wěn)定性研究:連續(xù)將食淀粉乳桿菌傳代25次,每隔3代測定其上清抗RV能力,測定結(jié)果顯示:各代食淀粉乳桿菌對RV抑制率差異不顯著,表明該株食淀粉乳桿菌菌株抗RV能力較為穩(wěn)定,具有較為良好的傳代穩(wěn)定性。2.益生菌共培養(yǎng)上清液抗RV能力測定:選取食淀粉乳桿菌和抗RV能力不等的4株屎腸球菌為實驗材料,探究該株食淀粉乳桿菌與不同株屎腸球菌共培養(yǎng)后,共培養(yǎng)上清液抗RV能力與單獨食淀粉上清液及單獨屎腸球菌上清液抗RV能力間的差異。實驗結(jié)果顯示:z4、z5和z8與食淀粉乳桿菌混合培養(yǎng)后上清液抗RV能力,介于單獨食淀粉乳桿菌和單獨z4、z5和z8上清液抗RV能力之間,差異不顯著(p0.05)。z7和食淀粉乳桿菌共培養(yǎng)上清液對RV抑制率均低于單獨屎腸球菌上清及單獨食淀粉乳桿菌上清。說明該株食淀粉乳桿菌有良好的共培養(yǎng)穩(wěn)定性。二、體內(nèi)實驗部分。主要包括食淀粉乳桿菌體內(nèi)對RV感染小鼠乳鼠的相關(guān)效應和食淀粉乳桿菌對乳鼠空腸神經(jīng)節(jié)苷脂GM3作用兩方面。試驗乳鼠分為4組:正常組、病毒組、先灌胃益生菌后攻毒組-食淀粉組(Gavaged probiotic before inoculation group,BI group)和先攻毒后灌胃益生菌組-治療組(Gavaged probiotic after inoculation group,AI group),26只每組,共飼喂11天(d),從1d開始BI組每只每天灌胃50μL益生菌活菌液(106cfu/mL),其他組每只每天飼喂等量PBS,病毒組、BI組和AI組4d時每只小鼠飼喂毒力為10-6.28TCID50/mL輪狀病毒50μL,AI組在4d時每天灌胃50μL益生菌活菌液(106cfu/mL)。1.食淀粉乳桿菌體內(nèi)對RV感染小鼠乳鼠的相關(guān)效應:感染RV乳鼠的體重增長率升降、糞樣病毒量多少和空腸黏膜組織學變化。(1)體重增長率測定結(jié)果顯示:飼喂1d~4d時各組體重增長率差異不顯著(p0.05);飼喂4d~11d時正常組體重增長率顯著高于其他組別(p0.05);攻毒前后飼喂食淀粉乳桿菌,乳鼠體重增長率仍會出現(xiàn)一定程度的降低;BI組及AI組體重增長率顯著高于病毒組(p0.05),BI組和AI組體重增長率差異不顯著(p0.05)。(2)糞樣病毒量測定結(jié)果顯示:感染后2d、3d、4d、5d及7d時BI組RV含量均顯著低于病毒組(p0.05);AI組在感染后4d時RV含量顯著低于病毒組(p0.05),其他時間點差異不顯著。(3)空腸黏膜組織學變化結(jié)果顯示:病毒組小腸上皮細胞出現(xiàn)輕微空泡變性,小腸絨毛內(nèi)部組織缺失較為嚴重,絨毛上皮細胞形態(tài)發(fā)生顯著變化,BI組及AI相對于病毒組,相關(guān)癥狀明顯減輕;BI組空腸絨毛長度在攻毒后1d和3d時顯著高于病毒組(p0.05),和正常組差異不顯著(p0.05);AI組空腸絨毛長度大于病毒組,但差異不顯著(p0.05);攻毒后5d、7d時各組絨毛長度差異不顯著(p0.05)。2.食淀粉乳桿菌對乳鼠空腸神經(jīng)節(jié)苷脂GM3影響實驗分為兩個方面:乳鼠空腸組織GM3定量ELISA檢測和乳鼠空腸組織GM3合成酶m RNA檢測。(1)乳鼠空腸組織GM3定量ELISA檢測結(jié)果顯示,攻毒前:2d~4d時BI組及正常組差異不顯著(P0.05),攻毒后:5d、9d及11d時BI組神經(jīng)節(jié)苷酯GM3含量顯著高于正常組及病毒組(P0.05);9d時病毒組神經(jīng)節(jié)苷酯GM3含量顯著高于正常組(P0.05);AI在5d和11d時顯著高于病毒組(p0.05),AI組在9d和11d時顯著低于BI組。(2)乳鼠空腸組織GM3合成酶Mus St3gal5mRNA結(jié)果顯示:攻毒前,BI組與正常組在2d、3d、4d時均差異不顯著(p0.05),攻毒后,5d、9d時病毒組水平顯著低于正常組(p0.05);7d、9d及11d時BI組水平顯著低于病毒組(p0.05);5d、7d時AI組水平略低于病毒組(p0.05)。(3)乳鼠空腸組織GM3合成酶Mus UGCGm RNA結(jié)果顯示:攻毒前,3d時BI組與正常組差異不顯著(p0.05),攻毒后:7d、9d時病毒組水平均顯著低于正常組(p0.05);7d、9d、10d時BI組水平顯著低于正常組及病毒組(p0.05),11d時AI組水平顯著低于病毒組(p0.05)。綜上所述連續(xù)25代培養(yǎng)以及與4株屎腸球菌共培養(yǎng)后,該株食淀粉乳桿菌其抗RV能力仍然保持相對的穩(wěn)定性。該株食淀粉乳桿菌接種RV感染前后的乳鼠,其小腸上皮細胞中RV受體神經(jīng)節(jié)苷酯GM3,在RV感染前與正常組一致,在RV感染后明顯升高;顯著減少乳鼠糞便中RV含量、減輕RV對乳鼠小腸絨毛損傷、抑制小腸隱窩增生、改善體重增長率的降低。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S855.3

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 趙毅博;田宗民;王瑩瑩;魏萍;;食淀粉乳桿菌代謝產(chǎn)物抑菌與抗病毒的比較研究[J];中國畜牧獸醫(yī);2014年08期

2 高順平;吳國華;張強;;病毒受體及其研究進展[J];中國獸醫(yī)科學;2012年02期

3 黃兵;劉寧;黃英;陳勁春;;放線菌與枯草芽孢桿菌的共培養(yǎng)及其對活性次生代謝產(chǎn)物的影響[J];生物工程學報;2009年06期

4 寧娜;陳乃宏;;神經(jīng)節(jié)苷脂的生物學活性[J];生理科學進展;2009年01期

5 張璐;張敏紅;;飼用益生菌產(chǎn)品評價研究進展[J];中國畜牧獸醫(yī);2008年03期

相關(guān)會議論文 前1條

1 廖波;張克英;丁雪梅;徐志文;白世平;;飼糧添加25-羥基維生素D_3對輪狀病毒攻毒和未攻毒斷奶仔豬血清和腸內(nèi)容物抗體和細胞因子水平的影響[A];第五屆中國畜牧科技論壇論文集[C];2011年

相關(guān)博士學位論文 前1條

1 陳軍華;輪狀病毒感染動物模型建立及其發(fā)病機制研究[D];重慶醫(yī)科大學;2007年

相關(guān)碩士學位論文 前3條

1 王娟娟;哺乳動物上皮細胞中鞘糖脂在登革病毒感染中的作用[D];蘇州大學;2015年

2 張穎;人胚胎干細胞傳代培養(yǎng)方法與其遺傳穩(wěn)定性的相關(guān)研究[D];鄭州大學;2014年

3 高長春;豬腸道抗TGEV益生菌株篩選及其體外抗病毒作用[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2012年

，

本文編號：2264890