【摘要】：應(yīng)用PCR擴增出PEDV毒株的纖突糖蛋白S基因序列,并將其克隆到原核表達載體pGEX-4T-1中,構(gòu)建出pGEX-4T-1-S表達載體。應(yīng)用IPTG誘導(dǎo)表達重組S蛋白,并將重組蛋白以弗氏完全/不完全佐劑乳化后免疫小鼠,制備抗PEDV S蛋白的單克隆抗體,并以此建立了檢測PEDV抗原的雙抗體夾心ELISA方法,確定、優(yōu)化了所建立的ELISA反應(yīng)條件。以建立的雙抗體夾心ELISA和RT-PCR方法對PEDV樣品進行了比較檢測,兩者的符合率為100%。應(yīng)用ELISA檢測了吉林省疑似PED流行豬場的糞便樣品,發(fā)現(xiàn)PEDV陽性檢出率為68%。該研究為PED診斷及流行病學(xué)調(diào)查提供了一種特異、敏感、快速和易于在基層應(yīng)用的技術(shù)方法及本病的防治提供了流行病學(xué)理論依據(jù)。
[Abstract]:The protein S gene of PEDV strain was amplified by PCR and cloned into prokaryotic expression vector pGEX-4T-1 to construct pGEX-4T-1-S expression vector. IPTG was used to induce the expression of recombinant S protein. Mice were immunized with Freund's complete / incomplete adjuvant to prepare monoclonal antibody against PEDV S protein. A sandwich ELISA method for detecting PEDV antigen was established. The ELISA reaction conditions were optimized. The double antibody sandwich ELISA and RT-PCR method were used to compare and detect the PEDV samples. The coincidence rate of the two methods was 100. ELISA was used to detect fecal samples of suspected PED epidemic pig farm in Jilin province, and the positive rate of PEDV was 68%. This study provides an epidemiological theoretical basis for the diagnosis and epidemiological investigation of PED, which is specific, sensitive, rapid and easy to be applied at the grass-roots level.
【作者單位】： 吉林大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院;吉林大學(xué)人獸共患病研究所;吉林大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院;
【基金】：國家重點研發(fā)計劃資助項目(2017YFD0500104,2016YFD0500904)
【分類號】：S852.651

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本文編號：2214182