【摘要】：根據(jù)胸腺五肽(TP5)的基因序列,進(jìn)行植物乳桿菌(Lp1)密碼子偏嗜性修飾,并克隆至由超強(qiáng)啟動(dòng)子SCP驅(qū)動(dòng)外源基因表達(dá)的植物乳桿菌表達(dá)載體p SCPSP,電轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌植物乳桿菌。通過PCR篩選出陽性重組轉(zhuǎn)化子,并用胸腺五肽ELISA特異性檢測試劑盒檢測重組植物乳桿菌16 h、20 h、24 h、28 h培養(yǎng)上清中目的蛋白的表達(dá)含量。用培養(yǎng)第12小時(shí)的乳桿菌灌胃剛斷奶的SPF級(jí)BALB/c小鼠,每日1次,連續(xù)14 d,以小鼠的胸腺指數(shù)、脾指數(shù)和血清中IL-2的含量為指標(biāo)檢測TP5的生物活性。ELISA結(jié)果表明,在培養(yǎng)第24小時(shí)目的蛋白表達(dá)含量最高,且重組植物乳桿菌能顯著增加小鼠的胸腺指數(shù)和血清中IL-2的含量,對(duì)脾指數(shù)無顯著影響。結(jié)果表明,TP5在植物乳桿菌中成功表達(dá),并有良好的生物活性。
[Abstract]:According to the gene sequence of thymus pentapeptide (TP5), the codon of Lactobacillus plantarum (Lp1) was modified and cloned into Lactobacillus plantarum expression vector, which was driven by superstrong promoter SCP, and was electrotransformed into Lactobacillus plantarum. The positive recombinant transformants were screened by PCR, and the expression of target protein in the supernatant of recombinant Lactobacillus plantarum was detected by ELISA assay kit. SPF grade BALB/c mice were fed with Lactobacillus lactis for 12 hours, once a day for 14 days. The index of thymus, spleen index and the content of IL-2 in serum were used as indexes to detect the bioactivity of TP5. Elisa results showed that: 1. The expression of target protein was the highest at the 24th hour of culture, and the recombinant Lactobacillus plantarum could significantly increase the thymus index of mice and the content of IL-2 in serum, but had no significant effect on spleen index. The results showed that TP5 was successfully expressed in Lactobacillus plantarum and had good bioactivity.
【作者單位】： 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院;
【基金】：廣東省省級(jí)科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013B020202002)
【分類號(hào)】：S859.79

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本文編號(hào)：2166001