【摘要】：腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TRAF6)是天然免疫信號通路中重要的接頭分子,筆者旨在探索豬TRAF6的抗病毒和免疫調(diào)控功能。首先利用RT-PCR從豬外周血單核細(xì)胞克隆該基因,并進(jìn)行序列比對分析;其次利用Piggybac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)建立豬TRAF6穩(wěn)定表達(dá)的PK-15細(xì)胞系;最后在細(xì)胞水平檢測豬TRAF6對偽狂犬病病毒復(fù)制的影響以及對豬IFN-β等啟動子活性的影響。結(jié)果顯示,豬TRAF6基因為1 623bp;將豬TRAF6基因連接到Piggybac轉(zhuǎn)座子質(zhì)粒成功構(gòu)建真核表達(dá)載體PB-TRAF6,然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染PK-15細(xì)胞,經(jīng)藥物處理和熒光篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)TRAF6的細(xì)胞系;通過熒光定量PCR和Western blot確定穩(wěn)定細(xì)胞系TRAF6的高效表達(dá);體外抗病毒試驗表明,TRAF6穩(wěn)定細(xì)胞系能夠顯著抑制偽狂犬病病毒的復(fù)制;雙熒光報告基因法檢測發(fā)現(xiàn),TRAF6可以促進(jìn)poly(I:C)誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素應(yīng)答。結(jié)果提示豬TRAF6具有顯著的抗病毒和免疫調(diào)節(jié)功能,為研究TRAF6的免疫學(xué)功能奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Tumor necrosis factor receptor-associated factor 6 (TRAF6) is an important junction molecule in innate immune signaling pathway. The purpose of this study is to explore the antiviral and immunomodulatory functions of porcine TRAF6. Firstly, the gene was cloned from porcine peripheral blood monocytes by RT-PCR and sequenced, then the PK-15 cell line with stable expression of porcine TRAF6 was established by Piggybac transposition subsystem. Finally, the effects of porcine TRAF6 on pseudorabies virus replication and IFN- 尾 promoter activity were detected at cell level. The results showed that the porcine TRAF6 gene was linked to Piggybac transposon plasmid to construct the eukaryotic expression vector PB-TRAF6, and the recombinant plasmid was transfected into PK-15 cells. The cell lines expressing TRAF6 stably were obtained by drug treatment and fluorescence screening. The high expression of the stable cell line TRAF6 was confirmed by fluorescence quantitative PCR and Western blot, and the antiviral test in vitro showed that the stable cell line could significantly inhibit the replication of pseudorabies virus. Double fluorescence reporter gene assay showed that TRAF6 could promote the type I interferon response induced by poly (I: C). The results suggested that porcine TRAF6 had significant antiviral and immunomodulatory functions, which laid a foundation for studying the immunological function of TRAF6.
【作者單位】： 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院;華中農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國家重點實驗室;河南省動物衛(wèi)生監(jiān)督所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31602033) 河南省高�？萍紕�(chuàng)新團(tuán)隊支持計劃(14IRTSTHN015)
【分類號】：S852.65

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 代卓見;偽狂犬病病毒分子生物學(xué)研究新進(jìn)展[J];國外獸醫(yī)學(xué).畜禽疾病;1996年01期

2 王家富,張光道,丁建華,羅滿林,張楚瑜;偽狂犬病病毒gⅢ基因的克隆及其鑒定[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;1997年04期

3 懷濟(jì)森,陳煥春;偽狂犬病病毒潛伏感染的研究[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;1997年03期

4 閻高峰,李健強;抗偽狂犬病病毒單克隆抗體的應(yīng)用[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;1999年01期

5 閻高峰,李健強;抗偽狂犬病病毒單克隆抗體的特性鑒定[J];青海畜牧獸醫(yī)雜志;1999年04期

6 邵偉娟,胡建華,謝建云,高誠,張婉華;偽狂犬病病毒滬株gE基因序列測定與比較分析[J];上海農(nóng)業(yè)學(xué)報;2005年04期

7 殷華平;郭萬柱;徐志文;楊麗;;影響偽狂犬病病毒同義密碼子用法特點的因素分析[J];浙江大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版);2007年03期

8 呂建強;何云蔚;盧體康;花群義;秦智鋒;陶虹;楊俊興;阮周曦;;偽狂犬病病毒實時熒光PCR的建立和應(yīng)用[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年03期

9 何妍萍;賈懷杰;王盈盈;劉太安;景志忠;;偽狂犬病病毒載體及其應(yīng)用的研究進(jìn)展[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2013年10期

10 閻高峰;偽狂犬病病毒毒力基因研究進(jìn)展[J];青海畜牧獸醫(yī)雜志;1998年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 趙鳳云;涂長春;張玉靜;歐陽紅生;張永亮;劉思國;劉伯華;;偽狂犬病病毒基因缺失突變體的克隆與測序[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會第八屆會員代表大會暨全國學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2001年

2 李富強;張莉;劉尚高;王雙山;靳玉芬;歐陽素貞;;偽狂犬病病毒北京株的純化及電鏡觀察[A];豬的重要傳染病防治研究新成果——中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第五屆理事會第二次全體會議暨防檢疫專業(yè)委員會第7次學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2002年

3 崔保安;付元帥;張素梅;魏戰(zhàn)勇;楊明凡;;金銀花對偽狂犬病病毒體外抑制作用的實驗研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會論文集（上）[C];2003年

4 呂素芳;郭廣君;魏鳳;唐娜;沈志強;;重組偽狂犬病病毒疫苗的研究進(jìn)展[A];首屆中國獸藥大會——獸醫(yī)生物制品學(xué)、獸醫(yī)微生物學(xué)學(xué)術(shù)論壇論文集（2008）[C];2008年

5 胡勤芹;馬相如;陳煥春;;偽狂犬病病毒的結(jié)構(gòu)蛋白與功能[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會論文集（上）[C];2003年

6 湯德元;郝飛;李春燕;曾智勇;羅險峰;甘振磊;劉建;王洪光;;偽狂犬病病毒Guizhou-DY株的分離鑒定及致病性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

7 郭廣君;呂素芳;肖躍強;畢研麗;沈志強;丁壯;;偽狂犬病病毒Us3基因編碼蛋白的功能研究進(jìn)展[A];第五屆中國畜牧科技論壇論文集[C];2011年

8 婁高明;敖敬群;廖筱萍;王殉章;;偽狂犬病病毒閩A株糖蛋白gC基因全序列的克隆與分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第六次研討會論文集[C];2005年

9 劉慶偉;邱亞峰;王曉杜;郭林;劉超;沈陽;李向東;單虎;馬志永;;抗PRV gC抗體制備及PRV gC表達(dá)的分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會第二次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

10 敖敬群;婁高明;陳新華;廖筱萍;楊林;杜偉賢;龍綮新;王s閼，

本文編號：2133581