【摘要】：減蛋綜合征病毒(Egg Drop Syndrome Virus,EDSV)屬于禽腺病毒Ⅲ型,能夠使蛋雞產(chǎn)軟殼、薄殼、無殼蛋,產(chǎn)蛋率嚴(yán)重下降,造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本病可使雞產(chǎn)蛋率下降20%~30%,蛋的破損率達(dá)30%~40%,被列為世界上危害養(yǎng)雞業(yè)最嚴(yán)重的四大病毒性傳染病之一。1976年Van Eck首先報(bào)道了本病在荷蘭發(fā)生,1977年分離到EDS病毒。自1991年以來,在中國從北向南,從東到西迅速傳播,廣泛流行。在中國,1991年首次從南京某雞場分離到雞源EDS病毒,命名為NE4株,1992年從一群產(chǎn)蛋減少的鴨群中分離出鴨源EDS病毒,命名為JE1株。鴨被普遍認(rèn)為是該病原的宿主之一,EDSV對鴨并不存在致病性,但是自從Bartha等1984年首次從產(chǎn)蛋下降的鴨群中分離到該病毒以來,越來越多的關(guān)于EDSV對鴨的研究在國內(nèi)外開展起來。近年來,國內(nèi)外的研究表明:在一定的條件下,鴨感染EDS-76病毒后可以使鴨發(fā)病并引起嚴(yán)重的產(chǎn)蛋下降。因此加強(qiáng)對該病的研究,有利于保護(hù)和促進(jìn)我國養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展。本研究選用62只62周齡健康種鴨,隨機(jī)分為兩組,每組31只。其中10只用來觀察產(chǎn)蛋量變化,21只用來采集試驗(yàn)所需材料。利用分離的雞源減蛋綜合征病毒SD01株通過口腔接種途徑人工感染62周齡種鴨,每只接種1.5 mL 10-3.6EID50/0.2 mL尿囊液,觀察試驗(yàn)種鴨的發(fā)病情況及臨床癥狀,在感染后不同時(shí)間剖殺,觀察各組織器官的主要剖檢變化,收集組織和棉拭子用于測定試驗(yàn)鴨的器官載毒量和排毒情況。采集血清檢測抗體滴度和IL-4,IFN-γ的變化。按常規(guī)方法制備內(nèi)臟器官石蠟切片、HE染色,觀察各器官的顯微病變。結(jié)果顯示,試驗(yàn)鴨感染EDSV后出現(xiàn)輕微的呼吸道癥狀。攻毒組的IL-4、IFN-γ水平明顯高于對照組;病理組織學(xué)變化表現(xiàn)為大腦、腎臟、脾臟、肺臟、卵泡等器官內(nèi)出血以及淋巴細(xì)胞浸潤,輸卵管水腫、肝細(xì)胞腫脹。選擇高度保守的六鄰體蛋白基因設(shè)計(jì)一對擴(kuò)增引物和一條MGB探針。將回收PCR產(chǎn)物克隆到pMD18-T載體上、轉(zhuǎn)化,重組質(zhì)粒,將篩選的陽性質(zhì)粒10倍梯度倍比稀釋,作為構(gòu)建Taqman-MGB熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的模板。結(jié)果表明,建立的Taqman-MGB熒光定量PCR檢測方法敏感度高,最少能檢測到10 Copies/μL的模板,標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)較高,R2值均在0.99以上;特異性檢測結(jié)果表明,除EDSV有擴(kuò)增曲線外,其它病毒無擴(kuò)增曲線產(chǎn)生,說明該方法能特異性的檢測EDSV;重復(fù)性檢測結(jié)果表明,批內(nèi)、批間的變異系數(shù)均不大于1.5%。上述試驗(yàn)結(jié)果表明,建立的Taqman-MGB熒光定量PCR方法具有較高的特異性、穩(wěn)定性、靈敏性,適用于臨床上EDSV早期快速檢測。應(yīng)用已建立的Taqman-MGB熒光定量PCR方法對攻毒后3、7、14、21、28、35 d種鴨不同組織內(nèi)的病毒載量以及棉拭子內(nèi)的載毒量進(jìn)行檢測。結(jié)果表明,隨著攻毒天數(shù)的增長不同組織病毒載量也在不停變化。攻毒后在各組織中均能檢測到病毒存在;其中肝臟、輸卵管的病毒含量明顯高于其他內(nèi)臟器官,氣管、腸道中病毒含量最低。
[Abstract]:Egg drop syndrome virus (EDSV) belongs to avian adenovirus type 鈪，

本文編號：2130342