本文選題：BMSCs + TERT基因��； 參考：《內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)是存在于骨髓基質(zhì)中的多能干細(xì)胞,體外增殖能力強(qiáng),在特定誘導(dǎo)條件下可跨胚層分化為多種細(xì)胞,如中胚層來(lái)源的骨骼、軟骨、脂肪細(xì)胞.,外胚層來(lái)源的神經(jīng)細(xì)胞等。因取材方便加之免疫原性弱,成為理想的組織工程種子細(xì)胞,在細(xì)胞替代治療、基因治療及組織器官再生中具有重要的研究意義及臨床應(yīng)用價(jià)值。然而BMSCs體外增殖及多向分化能力隨著不斷傳代會(huì)逐步下降,因而使其在研究和應(yīng)用領(lǐng)域的作用受到局限。利用端粒逆轉(zhuǎn)錄酶(Telomerase reverse transcriptase,THRT)基因修飾BMSCs,可使其成為具有長(zhǎng)期持續(xù)增殖能力的“永生化”細(xì)胞,“永生化”的BMSCs可作為細(xì)胞工程和組織工程等研究領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞,在基礎(chǔ)研究及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中可發(fā)揮更為重要的作用。本論文以綿羊BMSCs為研究對(duì)象,構(gòu)建了TERT真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染綿羊BMSCs,經(jīng)篩選得到穩(wěn)定表達(dá)TERT基因的BMSCs細(xì)胞系,通過(guò)生物學(xué)特征分析及多向誘導(dǎo)分化與鑒定,證明經(jīng)TERT基因修飾的BMSCs,可在體外正常高效增殖,并依然保持多向分化能力。主要研究結(jié)果如下：1.體外克隆獲得綿羊TERT基因cDNA序列,采用pcDNA3.1-EGFP載體,經(jīng)基因重組成功構(gòu)建了TERT真核表達(dá)載體。2.TERT真核表達(dá)載體經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、G418篩選、RT-PCR檢測(cè),篩選得到了穩(wěn)定表達(dá)TERT基因的BMSCs細(xì)胞系。3.生長(zhǎng)曲線表明,經(jīng)7ERT基因修飾的BMSCs,比未經(jīng)基因修飾的BMSCs體外增殖能力更強(qiáng)；TERT-BMSCs細(xì)胞表達(dá)了干細(xì)胞表面因子Oct4、Sox2和Nanog至成脂細(xì)胞和成神經(jīng)細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng),分化細(xì)胞不僅出現(xiàn)成脂細(xì)胞特有的脂滴、成神經(jīng)細(xì)胞特有的形態(tài)和尼氏體,還表達(dá)了脂肪細(xì)胞特異基因PPAR peroxisome proliferator-activated receptor,過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體)LEPTIN(肥胖基因)及神經(jīng)元特異基因NSE (neuron-specific enolase,神經(jīng)元特異性烯醇化酶)和GFAP (glial fibrillary acidic protein,膠質(zhì)纖維酸性蛋白),表明TERT-BMSCs細(xì)胞仍保持跨胚層的多向分化能力。上述研究為探討B(tài)MSCs細(xì)胞永生化機(jī)制奠定了必要的基礎(chǔ)。
[Abstract]:Bone marrow - derived mesenchymal stem cells ( MSCs ) , which are derived from bone marrow stromal cells , can be differentiated into many kinds of cells , such as bone , cartilage , fat cells and neural cells .
The expression of the stem cell surface factors Oct4 , Sox2 and Nanog into adipocytes and neural cell - induced culture showed that the differentiated cells were not only the specific lipid droplets of the fat cells , but also the specific forms of the neuron specific genes ( PPAR ) LEPTIN ( obese gene ) and the neuron specific gene NSE ( neuron - specific NSE ) and GFAP ( GFAP ) .
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：Q78;S826

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 代飛,吳軍,易紹萱,賀偉峰,陳希煒,張小容;人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因和EGFP共表達(dá)真核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定[J];重慶醫(yī)學(xué);2004年08期

2 趙超;白麗霞;屠錚;魏麗惠;;人乳頭狀瘤病毒16型E6、E7基因轉(zhuǎn)染的人宮頸上皮永生化細(xì)胞系的建立及鑒定[J];中國(guó)婦產(chǎn)科臨床雜志;2006年04期

3 程千松;王興兵;汪健;虞國(guó)慧;;Toll樣受體激動(dòng)劑對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨及成脂分化的影響[J];安徽醫(yī)學(xué);2015年01期

4 金丹 ,裴國(guó)獻(xiàn) ,齊鳳菊 ,胡罷生 ,魏寬海 ,王珂 ,陳濱;hBMP_7基因轉(zhuǎn)染對(duì)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及膠原合成的影響[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2002年06期

5 胡學(xué)昱,羅卓荊,田爽;成人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)及初步誘導(dǎo)分化研究[J];中國(guó)脊柱脊髓雜志;2005年10期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 黃國(guó)平;轉(zhuǎn)人端粒酶基因骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的構(gòu)建及其細(xì)胞特征分析[D];浙江大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 葉田;TERT在人卵巢顆粒細(xì)胞中的表達(dá)及與體外受精—胚胎移植結(jié)局關(guān)系的研究[D];鄭州大學(xué);2013年

，

本文編號(hào)：2098381