本文選題：新城疫病毒 + H亞型禽流感病毒　； 參考：《養(yǎng)禽與禽病防治》2016年04期

【摘要】：根椐GenBank中登錄的新城疫病毒(NDV)、H9亞型禽流感病毒[AIV(H9)]和傳染性法氏囊病病毒(IBDV)基因序列,分別設(shè)計(jì)3對(duì)引物,在建立各病毒單項(xiàng)一步法RT-PCR技術(shù)的基礎(chǔ)上,優(yōu)化多重RT-PCR反應(yīng)條件,建立了3種病毒的一步法多重RT-PCR檢測(cè)方法,用這3對(duì)引物對(duì)同一樣品中的NDV、AIV(H9)和IBDV核酸模板進(jìn)行多重RT-PCR擴(kuò)增,結(jié)果可同時(shí)擴(kuò)增NDV的466bp、AIV(H9)的685bp和IBDV的244bp的特異性片段,而對(duì)其他4種病原的擴(kuò)增結(jié)果均為陰性。敏感性測(cè)定結(jié)果表明,該多重RT-PCR技術(shù)能檢出10pg的NDV、10pg的AIV(H9)和1pg的IBDV模板。用53份臨床病料對(duì)本研究多重RT-PCR技術(shù)和單項(xiàng)RT-PCR技術(shù)進(jìn)行對(duì)比驗(yàn)證,結(jié)果顯示,兩者的總符合率為100%。表明建立的一步法多重RT-PCR檢測(cè)方法,具有特異、快速及準(zhǔn)確的特點(diǎn),可用于對(duì)這3種病毒的同時(shí)檢測(cè)和鑒別診斷。
[Abstract]:Three pairs of primers were designed based on the sequence of NDV / H9 subtype avian influenza virus (NDV) and infectious bursal disease virus (IBDVV) gene of Newcastle disease virus (NDV) and Infectious bursal Disease virus (IBDVV) registered in GenBank. The conditions of multiplex RT-PCR were optimized on the basis of single one-step RT-PCR of each virus. A one step multiplex RT-PCR method was established for the detection of three viruses. The three pairs of primers were used to amplify NDV AIVH9) and IBDV nucleic acid template in the same sample. The results showed that the specific fragments of 685bp and IBDV 244bp of NDV 466bpAIVAIVH9) and IBDV could be amplified simultaneously. The amplification results of the other four pathogens were all negative. The sensitivity test showed that the multiplex RT-PCR could detect the 10pg NDV 10pg AIVDV 9) and the 1pg IBDV template. The multiplex RT-PCR technique and single RT-PCR technique were compared with 53 clinical samples. The results showed that the total coincidence rate of the two methods was 100. The results showed that the one-step multiplex RT-PCR assay was specific, rapid and accurate, and could be used for simultaneous detection and differential diagnosis of the three viruses.
【作者單位】： 山東綠都生物科技有限公司;山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院;
【基金】：山東省現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系家禽創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)生產(chǎn)與環(huán)境控制創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(SDAIT-13-011-10) 山東省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(2015GSF121027) 2015年度山東省引進(jìn)國(guó)外智力成果示范推廣項(xiàng)目
【分類號(hào)】：S852.65

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本文編號(hào)：2038086