本文選題：型豬鏈球菌 + 絲狀溫度敏感蛋白��； 參考：《中國人獸共患病學報》2017年03期

【摘要】：目的制備2型豬鏈球菌絲狀溫度敏感蛋白(Filamentous temperature-sensitive protein Z,FtsZ)重組蛋白并測定其水解三磷酸鳥苷(GTP)的酶活性。方法從2型豬鏈球菌中國強毒株05ZYH33基因組中PCR擴增目的基因ftsz,構建重組表達質粒pET28a-ftsz,轉化E.coli BL21(DE3)感受態(tài)細胞,篩選陽性轉化子進行IPTG誘導表達,SDS-PAGE鑒定表達產物,Ni 2+親和層析柱純化重組蛋白,Western blot分析。重組蛋白免疫新西蘭兔后收集多抗血清,間接ELISA法檢測抗體效價,用孔雀綠-磷酸檢測法測定FtsZ重組蛋白的GTP酶活性。結果成功構建pET28a-ftsz重組表達質粒;純化獲得大量純度較高的FtsZ重組蛋白;ELISA檢測兔多抗血清效價達1∶13 107 200;Western blot顯示FtsZ重組蛋白能夠與His-Tag單抗和兔多抗血清發(fā)生反應;以GTP為底物檢測重組蛋白具有GTP酶活性。結論成功制備了具有GTP酶活性的2型豬鏈球菌FtsZ重組蛋白并以重組蛋白為抗原制備出高效價的多抗血清,為進一步研究2型豬鏈球菌FtsZ在細胞分裂調控過程中的作用奠定基礎。
[Abstract]:Objective to prepare the recombinant protein of Streptococcus suis type 2 filamentous temperature-sensitive protein zFtsZ and to determine the enzyme activity of its hydrolyzed guanosine triphosphate (GTP). Methods the target gene ftsz was amplified by PCR from the 05ZYH33 genome of Streptococcus suis type 2 Chinese virulent strain. The recombinant expression plasmid pET28a-ftsz was constructed and transformed into E.coli BL21DE3. The recombinant protein was purified by IPTG induced SDS-PAGE and purified by affinity chromatography with Ni2 affinity chromatography. After the recombinant protein was immunized with New Zealand rabbits, the polyantiserum was collected and the antibody titer was detected by indirect ELISA method. The GTP enzyme activity of FtsZ recombinant protein was determined by malachite green phosphoric acid assay. Results the recombinant expression plasmid of pET28a-ftsz was successfully constructed, and a large number of purified FtsZ recombinant proteins were purified. The titer of rabbit polyclonal antiserum detected by Elisa was 107,200 tons. The results showed that FtsZ recombinant protein could react with His-Tag monoclonal antibody and rabbit polyclonal antibody serum. GTP was used as the substrate to detect the GTP activity of the recombinant protein. Conclusion the recombinant protein of Streptococcus suis type 2 FtsZ with GTP enzyme activity was successfully prepared and the polyclonal antibody serum with high titer was prepared by using the recombinant protein as antigen, which laid a foundation for further study on the role of FtsZ type 2 in the regulation of cell division.
【作者單位】： 中國藥科大學中藥學院;南京軍區(qū)軍事醫(yī)學研究所;
【基金】：國家自然科學基金(No.81571965,No.81471920) 江蘇省自然科學基金(No.BK20151091) 江蘇省333工程科研資助項目(No.BRA2014363)聯(lián)合資助~~
【分類號】：S852.611

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 朱鳳才,楊華富,胡曉抒,汪華,王廣和,宋亞軍,楊瑞馥;人源和豬源豬鏈球菌的同源性研究[J];中華流行病學雜志;2000年06期

2 唐文淵 ,Zygmunt Pejsak;豬鏈球菌是一種條件性病原菌[J];國外畜牧學(豬與禽);2005年04期

3 查紅波;2型豬鏈球菌研究進展[J];江西飼料;2005年04期

4 許青華;重新認識豬鏈球菌[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2005年09期

5 劉華;喻華;周忠華;顏英俊;黃文方;;致生豬疫情的豬鏈球菌檢測結果分析[J];中華檢驗醫(yī)學雜志;2006年01期

6 崔正瀛;李學瑞;柳紀省;;2型豬鏈球菌的分子生物學研究進展[J];中國畜牧獸醫(yī)文摘;2006年03期

7 白昀;覃倫;龍劍明;熊毅;覃芳蕓;朱偉;郭建剛;李華明;劉棋;;豬鏈球菌9型的分離與鑒定[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;2007年01期

8 王福貴;龍忠臣;王海鵬;;臨床分離豬鏈球菌的藥物敏感性分析[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2007年06期

9 覃芳蕓;陳磊;潘杰;熊毅;白昀;朱偉;郭建剛;李華明;劉棋;;豬鏈球菌1型的分離與鑒定[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2007年09期

10 魯杏華;談志祥;何世成;劉道新;邱立新;范仲鑫;唐小明;鄭姣妹;;豬鏈球菌2型湖南株的分離與鑒定[J];中國獸醫(yī)雜志;2008年10期

相關會議論文 前10條

1 聶小想;崔言順;沈志強;管宇;逄媛;劉吉山;王艷;;20株豬鏈球菌核糖體基因多態(tài)性的研究[A];首屆中國獸藥大會——獸醫(yī)生物制品學、獸醫(yī)微生物學學術論壇論文集（2008）[C];2008年

2 劉梅芬;吳志明;閆若潛;盛敏;趙明軍;拜廷陽;;豬鏈球菌種與9型豬鏈球菌二重PCR檢測方法的建立及應用[A];中國畜牧獸醫(yī)學會小動物醫(yī)學分會第四次學術研討會、中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)外科學分會第十六次學術研討會論文集（2）[C];2009年

3 劉梅芬;吳志明;閆若潛;盛敏;趙明軍;拜廷陽;;豬鏈球菌種與9型豬鏈球菌二重PCR檢測方法的建立及應用[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學術研討會論文集（下冊）[C];2009年

4 張安定;朱偉峰;胡攀;金梅林;;豬鏈球菌分子流行病學研究[A];第三屆全國微生物資源學術暨國家微生物資源平臺運行服務研討會會議論文摘要集[C];2011年

5 何孔旺;倪艷秀;王繼春;何家惠;王偉峰;楊瑛;陸承平;林繼煌;;豬鏈球菌2型的分子流行病學研究[A];豬的重要傳染病防治研究新成果——中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第五屆理事會第二次全體會議暨防檢疫專業(yè)委員會第7次學術交流會論文集[C];2002年

6 徐建國;鄭翰;葉長蕓;景懷琦;;豬鏈球菌的二階段致病機理假說[A];第二屆全國人畜共患病學術研討會論文集[C];2008年

7 熊毅;劉棋;覃芳蕓;朱偉;徐賢坤;付薇;;廣西豬鏈球菌2型流行病學研究[A];第二屆全國人畜共患病學術研討會論文集[C];2008年

8 臧瑩安;謝樂新;李家僑;龐木生;李淼;宋帥;李春玲;;表觀健康的豬肉攜帶豬鏈球菌的調查[A];中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學分會第三次學術研討會論文集[C];2012年

9 羅玲;徐滌平;劉澤文;鄭浩;汪宏才;;豬鏈球菌2型的研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第六屆全國會員代表大會暨第11次學術研討會論文集[C];2005年

10 劉春生;徐耀輝;陳陸;楊霞;王新娟;高冬生;王永生;程海衛(wèi);劉春明;王川慶;;豬鏈球菌種及1、2、7型多重PCR檢測方法的建立及應用[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物傳染病學分會第四次豬病防控學術研討會論文集[C];2010年

相關重要報紙文章 前10條

1 記者 曾星;快速豬鏈球菌檢測方法問世[N];中國國門時報;2005年

2 記者 姚雷 張穎;豬鏈球菌檢測將有據(jù)可依[N];中國國門時報;2005年

3 雒慶舉;可能對“豬鏈球菌”設險嗎[N];中國保險報;2005年

4 井 韋;把四天縮短為四小時[N];中國質量報;2005年

5 菊　文;積極應對豬鏈球菌2型疫情[N];中國國門時報;2005年

6 記者 何成軍 見習記者 錢河山;豬鏈球菌疫情不足憂[N];甘肅經(jīng)濟日報;2005年

7 鄭靈巧;豬鏈球菌進犯人類告訴我們什么[N];健康報;2005年

8 北京地壇醫(yī)院主任醫(yī)師 蔡皓東;豬鏈球菌又到人間作孽[N];健康報;2005年

9 記者 原國鋒;豬鏈球菌快速檢測方法通過鑒定[N];人民日報;2005年

10 逸聞;豬鏈球菌序列變異導致毒力增加[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2006年

相關博士學位論文 前10條

1 姚新月;2型豬鏈球菌無毒株的分離鑒定與比較基因組學研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

2 潘子豪;致仔豬腦膜炎新型豬鏈球菌的鑒定[D];南京農業(yè)大學;2014年

3 方麗華;豬鏈球菌2型超氧化物歧化酶SodA與絲氨酸/蘇氨酸去磷酸酶Stp1影響細菌毒力研究[D];浙江大學;2016年

4 杜斌;豬鏈球菌2型環(huán)二腺苷酸（c-di-AMP）代謝相關基因的生物學功能研究[D];上海交通大學;2015年

5 高婷;tRNA修飾酶GidA調控豬鏈球菌的生長和致病性的機制研究[D];華中農業(yè)大學;2016年

6 譚美芳;MsmK調控豬鏈球菌生長和致病性的研究[D];華中農業(yè)大學;2016年

7 魏子貢;豬鏈球菌流行病學及其生物被膜形成機理研究[D];華中農業(yè)大學;2010年

8 李學瑞;豬鏈球菌防治新技術研究[D];中國農業(yè)科學院;2011年

9 吳全忠;豬鏈球菌2型在模型動物豚鼠體內的動態(tài)分布及基因免疫[D];南京農業(yè)大學;2001年

10 歐瑜;豬鏈球菌2型毒力相關蛋白的檢測及其基因片段的克隆與表達[D];南京農業(yè)大學;2001年

相關碩士學位論文 前10條

1 李曉云;東北地區(qū)豬鏈球菌對大環(huán)內酯類抗生素耐藥機制研究[D];東北農業(yè)大學;2009年

2 趙煥燦;浙江省豬鏈球菌血清及分子流行病學調查[D];浙江大學;2010年

3 張靜;豬鏈球菌二氫硫辛酰胺脫氫酶的生物學功能初探及串聯(lián)蛋白的免疫保護評價[D];上海交通大學;2012年

4 岳修偉;上海部分地區(qū)豬鏈球菌2型流行病學調查及其耐藥性研究[D];上海交通大學;2013年

5 黃開松;豬鏈球菌2型表面精氨酸肽酶的鑒定與其功能的研究[D];華中農業(yè)大學;2015年

6 劉金;豬樹突狀細胞在豬鏈球菌2型感染致炎癥風暴中的作用研究[D];華中農業(yè)大學;2015年

7 劉建濤;豬鏈球菌2型分支酸合成酶促炎機制研究[D];華中農業(yè)大學;2015年

8 龔秀芳;2型豬鏈球菌N-乙酰半乳糖胺和半乳糖胺代謝通路中SSU0448基因功能的初步研究[D];南京師范大學;2015年

9 陶醉;豬鏈球菌2型(p)ppGpp合成酶與核糖體相互作用的研究[D];華中農業(yè)大學;2013年

10 劉希健;豬鏈球菌2型轉錄因子SloR調控功能的研究[D];華中農業(yè)大學;2013年

，

本文編號：1977457