本文選題：自然轉(zhuǎn)化 + ΔWza缺失株��； 參考：《農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)》2015年06期

【摘要】：副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis,HPs)莢膜多糖目前被認(rèn)為是其主要的毒力因子之一,其Wza基因在莢膜多糖的合成運(yùn)輸方面起重要作用。本研究通過(guò)構(gòu)建p UC18-LR-Kan同源重組質(zhì)粒和運(yùn)用自然轉(zhuǎn)化法,以Kan抗性的TSA平板成功篩選出Wza基因缺失株(ZJ1208-ΔWza)。生物學(xué)特性研究表明,ZJ1208-ΔWza缺失株和ZJ1208野毒株的菌落形態(tài)無(wú)明顯差異,莢膜染色鏡檢表明在體外培養(yǎng)二者都能形成較薄的莢膜。在體外培養(yǎng)的生長(zhǎng)速率方面,二者都在約12 h時(shí)其OD600達(dá)到最大值,其中ZJ1208-ΔWza缺失株OD600為1.246,而ZJ1208野毒株為2.196,高于ZJ1208-ΔWza株0.95;二者活菌數(shù)在約8 h多達(dá)到最大,ZJ1208野毒株活菌數(shù)對(duì)數(shù)值為9.763 4,ZJ1208-ΔWza缺失株株約為9.322 2,低于ZJ1208野毒株。菌體形態(tài)方面,在培養(yǎng)6 h左右,ZJ1208-ΔWza缺失株菌體大多數(shù)可形成長(zhǎng)鏈狀或長(zhǎng)桿狀,而野毒株大多數(shù)為較松散,短小的單個(gè)菌體。與ZJ1208野毒株比較,ZJ1208-ΔWza株有較快的體外沉降速率,對(duì)豬肺泡巨噬細(xì)胞(porcine alveolar macrophage,PAM)的吞噬作用更加敏感,對(duì)小鼠毒力明顯減弱;以上結(jié)果表明,Wza基因的缺失對(duì)HPs ZJ1208株的多項(xiàng)生物學(xué)特性產(chǎn)生了影響。本研究為進(jìn)一步研究Wza基因在HPs莢膜形成中的作用提供基礎(chǔ)資料。
[Abstract]:Haemophilus parasuis (HPs) capsule polysaccharide is considered to be one of its main virulence factors, and its Wza gene plays an important role in the synthesis and transport of capsular polysaccharides. In this study, the homologous recombinant plasmid of p UC18-LR-Kan was constructed and the Wza gene deletion strain ZJ1208- 螖 WZA was successfully screened by using Kan resistant TSA plate. There was no significant difference in colony morphology between ZJ1208- 螖 Wza deletion strain and ZJ1208 wild strain, and capsule staining showed that both of them could form a thin capsule in vitro. In the growth rate of culture in vitro, the OD600 of both of them reached the maximum at about 12 h. The OD600 of ZJ1208- 螖 Wza deletion strain was 1.246, while that of ZJ1208 wild strain was 2.196, which was higher than that of ZJ1208- 螖 Wza strain 0.95.The number of live bacteria of ZJ1208- 螖 Wza strain reached the maximum in about 8 hours, and the logarithmic value of live strain of ZJ1208- 螖 Wza deletion strain was 9.322 2, which was lower than that of ZJ1208 strain. In terms of cell morphology, most of ZJ1208- 螖 Wza deletions could form long chain or long rod, while most of wild strains were loose and short. Compared with ZJ1208 wild strain, ZJ1208- 螖 Wza strain had a faster in vitro sedimentation rate, more sensitive to phagocytosis of porcine alveolar macrophage pam, and weakened virulence to mice. These results suggested that the deletion of the Wza gene had an effect on many biological characteristics of HPs ZJ1208 strain. This study provides basic data for further study of the role of Wza gene in the formation of HPs capsule.
【作者單位】： 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.31201934)
【分類號(hào)】：S852.61

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本文編號(hào)：1974107