發(fā)布時間：2018-05-24 00:32

  本文選題：中試加米霉素注射液 + 多殺性巴氏桿菌��； 參考：《石河子大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:大環(huán)內(nèi)酯類抗生素在動物呼吸道感染的治療上起著十分重要的作用。該藥主要通過直接與細菌核糖體的50S亞基結合抑制蛋白質的合成。目前臨床上使用治療呼吸道感染的藥物都存在不同程度的局限性,隨著新耐藥菌的不斷出現(xiàn),研制新型大環(huán)內(nèi)酯類抗生素迫在眉睫。法國梅里亞(MERIAL)公司開發(fā)的加米霉素(Gamithromycin)是動物專用抗生素,該藥分別于2007、2010和2011年被歐洲藥品局、加拿大保健產(chǎn)品與食品管理局和美國食品與藥品管理局批準用于防治溶血性曼氏桿菌、多殺性巴氏桿菌和睡眠嗜組織菌引起的牛呼吸道疾病。由于加米霉素具有吸收快、分布廣,肺組織中濃度高,消除緩慢,藥效持久,安全性高等優(yōu)點。本試驗對天津中升研發(fā)的中試加米霉素注射液進行抗菌活性、毒性、安全性評價等方面進行實驗室評價,為藥品的研發(fā)和申報批號提供基礎數(shù)據(jù)。方法:1、采集臨床以呼吸道癥狀發(fā)病牛的肺臟組織、氣管積液以及皮下膠凍樣浸潤液,在無菌條件下接種于BHI肉湯中,分離純化,經(jīng)過細菌形態(tài)染色觀察、培養(yǎng)特性和生化鑒定,以及細菌16S rRNA序列分析以確定治病菌種屬,通過PCR的方法擴增16S rRNA,測序比對分析;利用細菌種屬特異性的基因Kmt-1來確定細菌的種屬。2、參考CLSI的有關方法,采用微量二倍稀釋法測定中試加米霉素注射液對已分離出的牛肺炎支原體、多殺性巴氏桿菌和溶血曼式桿菌的最小抑菌濃度(MIC)。3、采用改良寇氏法對66只清潔級昆明系健康小鼠的半數(shù)致死量(LD50)進行測定;小鼠連續(xù)背部皮下給藥28d,觀察其對小鼠的長期毒性,中試加米霉素注射液分為高、中、低三個劑量(分別為219、109.4、10.94 mg/kg)和溶劑組,對臟器系數(shù)和組織病理學進行觀察。4、按照《化學藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術指導原則》(2005年)進行家兔皮膚刺激試驗、家兔注射部位刺激試驗、體外溶血試驗、豚鼠全身主動過敏試驗和豚鼠全身被動過敏試驗。結果:1、病牛病變的肺臟組織、氣管積液以及皮下膠凍樣浸潤液中分離出3株露珠狀、不溶血、灰白色的菌落,經(jīng)革蘭氏染色液染色后鏡檢,可觀察到革蘭氏陰性球桿菌,經(jīng)過梅里埃公司的細菌生化檢定儀以及相關配套試紙條(VITEK 2 COMPACT)對菌株進行生化鑒定,結果判定為多殺性巴氏桿菌。16S rRNA序列分析與NCBI上已經(jīng)公布的多殺性巴氏桿菌16S rRNA序列同源性在99%以上。將分離的巴氏桿菌注射到小鼠體內(nèi),小鼠全部死亡。結果表明,從病牛體內(nèi)分離得到3株多殺性巴氏桿菌。2、中試加米霉素對質控菌株(多殺性巴氏桿菌、溶血曼氏桿菌、金黃色葡萄球菌、支原體)抑菌效果明顯,最小抑菌濃度分別均為0.5μg/mL、0.5μg/mL、0.5μg/mL和1μg/mL,符合《動物源性細菌抗菌藥物敏感性試驗紙片法稀釋法執(zhí)行標準》上的質控范圍(0.5-4μg/mL),以及CLSI中《微量肉湯稀釋法和瓊脂稀釋法測定肺炎支原體MIC(μg/mL)解釋折點指南》上的質控范圍(0.5-1μg/m L)。3、加米霉素注射液LD50為1094.2mg/kg,95%可信限范圍為1000.0 mg/kg-1196.7mg/kg;連續(xù)28d背部皮下給藥的慢性毒性結果顯示動物臟器系數(shù)以及組織病理學檢查與對照組相比差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。4、體外溶血試驗結果為陰性,家兔刺激試驗為陰性,豚鼠全身過敏試驗結果為陰性。結論:成功從病牛體內(nèi)分離得到多殺巴氏桿菌。中試加米霉素注射液對于引起牛呼吸系統(tǒng)疾病的溶血性曼氏桿菌和多殺性巴氏桿菌以及支原體有較高的抗菌活性。根據(jù)化學物急性毒性LD50劑量分級表明加米霉素注射液屬于低毒性藥物,并結合刺激性試驗、體外溶血性試驗、全身過敏性試驗的結果,表明中試加米霉素注射液不會對靶動物產(chǎn)生不良影響。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S859.7

【參考文獻】

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本文編號：1926995