本文選題：鴨坦布蘇病毒 + 麻鴨雛鴨　； 參考：《華中農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：2010年4月以來,中國南部城市爆發(fā)了一種以產(chǎn)蛋鴨產(chǎn)蛋量急劇下降為特征的流行病,并迅速漫延到山東,河南等中部城市。2011年,該病被命名為“鴨坦布蘇病毒病”,該病感染率高,死亡率低,主要以產(chǎn)蛋量急劇下降為主要特征,肉鴨,雛鴨主要癥狀為站立困難,步態(tài)不穩(wěn),給養(yǎng)禽業(yè)帶來了巨大損失。鴨坦布蘇病毒屬于黃病毒科黃病毒屬,同種屬病毒有登革熱病毒,黃熱病毒,西尼羅河病毒等危害人體健康的病毒,不排除鴨坦布蘇病毒感染哺乳動物并引發(fā)疾病的可能性。鴨坦布蘇病毒目前尚無有效的疫苗防治,并且其致病機(jī)理也尚不明確。因此,對鴨坦布蘇病毒基因結(jié)構(gòu)分析及致病性研究是十分必要的。1.鴨坦布蘇病毒的分離與鑒定本實驗病料來自于湖北省麻城某發(fā)病鴨場。自然感染病鴨出現(xiàn)匍匐不能站立,劃水狀姿勢,產(chǎn)蛋量由50%下降至0。病鴨腦組織出現(xiàn)“血管袖套”“噬神經(jīng)元”等典型的非化膿性腦炎癥狀,脾組織淋巴細(xì)胞減少,卵泡粒膜與內(nèi)膜分離。將自然感染病鴨腦組織勻漿,經(jīng)RT-PCR初步鑒定為鴨坦布蘇病毒。病鴨腦組織勻漿液經(jīng)尿囊腔接種10日齡鴨胚,發(fā)現(xiàn)病毒可導(dǎo)致鴨胚胚體出血,胚體變小,肝有黃色斑塊。收獲的病毒尿囊液感染DEF細(xì)胞,經(jīng)增殖后收集含病毒的細(xì)胞液。將收獲的病毒細(xì)胞液感染BHK細(xì)胞,感染后48h開始出現(xiàn)細(xì)胞病變,BHK細(xì)胞出現(xiàn)圓縮,72h出現(xiàn)明顯的細(xì)胞病變。病毒的鴨胚半數(shù)致死量和蝕斑單位分別為10-4.42ELD50/0.3mL和4.72×107pfu/m L,BHK細(xì)胞的間接熒光試驗發(fā)現(xiàn)病毒出現(xiàn)在BHK細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中,血凝試驗發(fā)現(xiàn)病毒不凝集雞紅細(xì)胞。電子顯微鏡下觀察,病毒粒子為圓形,直徑為40~60nm,有囊膜。綜上可確定實驗室分離的毒株為鴨坦布蘇病毒,并將其命名為MC株。2.鴨坦布蘇病毒全序列的測定RT-PCR測定病毒全序列,拼接后進(jìn)行分析。測得的病毒全基因組序列上傳GenBank并將其命名為MC株。鴨坦布蘇病毒MC株全基因組序列與黃病毒科黃病毒屬的代表毒株做遺傳進(jìn)化分析,發(fā)現(xiàn)其與Sitiawan virus處于同一分支,親緣性最近。同源性比對發(fā)現(xiàn),其與Sitiawan virus的同源性較高,為87.1%,與Yellow fever virus的同源性最低,為53.1%。MC株全基因組序列長10990bp,僅含有一個開放性閱讀框,大小為10278bp,共編碼3425個氨基酸。蛋白裂解位點與其他黃病毒相似,閱讀框由3個結(jié)構(gòu)蛋白(PrM,C,E)和7個非結(jié)構(gòu)蛋白組成(NS1,NS2A,NS2B,NS3,NS4A,NS4B,NS5)。糖基化位點預(yù)測發(fā)現(xiàn)MC株在非結(jié)構(gòu)蛋白NS5的數(shù)量與其他坦布蘇病毒有差異。RNAfold預(yù)測基因組非編碼區(qū)二級結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn),MC株與其他黃病毒相似,在5’端非編碼序列有大莖環(huán)結(jié)構(gòu)SLA,小莖環(huán)結(jié)構(gòu)SLB。3’非編碼區(qū)有莖環(huán)結(jié)構(gòu)3’SL。MC株在3’端非編碼區(qū)的保守序列與其他坦布蘇病毒相似性極高。蛋白序列同源性分析發(fā)現(xiàn)與其他鴨坦布蘇病毒的同源性均在97%以上。3.MC株鴨坦布蘇病毒對麻鴨雛鴨的致病性MC株鴨坦布蘇病毒接種7日齡的雛鴨,攻毒后7天,全部剖殺,將心,肝,脾,肺,腎,腦等組織用10%福爾馬林固定;同時取腦組織勻漿,RT-PCR檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)人工感染組3個鴨坦布蘇病毒陽性。病理組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)3只檢測到病毒的鴨腦組織出現(xiàn)“血管袖套”“噬神經(jīng)元”等典型的非化膿性腦炎癥狀,脾組織白細(xì)胞減少,免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)其陽性信號出現(xiàn)在腦組織神經(jīng)元細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中以及脾等其他組織內(nèi)紅細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。
[Abstract]:Since April 2010 , the southern city of southern China has exploded into an epidemic characterized by a dramatic decline in egg production from egg laying ducks and has spread rapidly to central cities such as Shandong , Henan , etc . In 2011 , the disease was designated as " duck tansovirus disease " The results showed that the virus could lead to the development of duck embryo . The results showed that the virus could be isolated from duck embryo . Three structural proteins ( PrM , NS2A , NS2B , NS3 , NS4A , NS4A , NS2B , NS3 , NS4A , NS4A , NS2B , NS3 , NS4A , NS4B , NS5 ) were identified in the reading frame .
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S852.65

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1912045