發(fā)布時間：2018-05-15 01:28

  本文選題：禾谷鐮刀菌 + 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇��； 參考：《安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)是由鐮刀菌屬病原真菌產(chǎn)生的一種對畜禽有著廣泛毒性的毒素。廣泛存在于農(nóng)產(chǎn)品和飼料中,被世界衛(wèi)生組織認(rèn)定為最危險的天然產(chǎn)生的霉菌毒素之一。雖然DON在其它毒性方面的研究較為成熟,但是由于神經(jīng)系統(tǒng)較為復(fù)雜,DON在神經(jīng)方面的毒性機(jī)制仍不明確,有待于進(jìn)一步試驗(yàn)探索。本試驗(yàn)首先培養(yǎng)禾谷鐮刀菌,進(jìn)行DON毒素的提取、純化。選取120只臨床檢查健康的1日齡海蘭公雞,預(yù)飼一周后,按單因素的試驗(yàn)設(shè)計,將雛雞隨機(jī)分成4組,每組30只。試驗(yàn)所有動物均飼喂全價飼料,低劑量組、中劑量組和高劑量組分別按采食飼料中DON0.27mg·kg~(-1)、1.68mg·kg~(-1)、12.21mg·kg~(-1)的含量進(jìn)行灌胃,對照組灌服與試驗(yàn)組同等量的生理鹽水,試驗(yàn)從第8d開始,每隔7d染毒一次,共染毒5次。試驗(yàn)期36d。每次染毒前,每組隨機(jī)抽取10只雞,經(jīng)翅下靜脈采血,分離血清,用于血清中DON蓄積量的測定。試驗(yàn)結(jié)束時,每組屠宰20只雞,迅速取出腦組織,稱重、觀察腦部剖檢病變,檢測腦組織中DON的蓄積、鈣穩(wěn)態(tài)、神經(jīng)遞質(zhì)含量,并觀察腦大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果顯示:1.在溫度27℃、含水量為45%的條件下,禾谷鐮刀菌在玉米培養(yǎng)基上生長較好,培養(yǎng)20d時產(chǎn)毒量最高,經(jīng)HPLC檢測發(fā)現(xiàn)此霉變玉米中含DON51.26 mg·kg~(-1),采用多重結(jié)晶的純化方法,得到DON的純品,純度高達(dá)94.01%。2.與對照組相比,從第二次灌胃開始,試驗(yàn)組雞只出現(xiàn)精神沉郁,食欲減退,個體差異大,有少量呈淡綠色稀糞,偶有血便,且臨床癥狀隨著染毒劑量的增加而加重;剖檢發(fā)現(xiàn),隨著染毒劑量的增加,試驗(yàn)組雞腦組織出現(xiàn)不同程度的腫大和出血點(diǎn),并呈現(xiàn)腦組織顏色逐漸變暗的現(xiàn)象。試驗(yàn)結(jié)束時,HPLC檢測各劑量組雛雞血清和腦組織中均未發(fā)現(xiàn)DON蓄積。3.組織病理切片顯示,與對照組相比,低劑量組雛雞大腦細(xì)胞間隙增大,部分神經(jīng)細(xì)胞周圍的小膠質(zhì)細(xì)胞增多;中劑量組雛雞大腦細(xì)胞間隙增大,神經(jīng)細(xì)胞周圍的小膠質(zhì)細(xì)胞開始吞噬神經(jīng)細(xì)胞;高劑量組雛雞大腦細(xì)胞變得稀疏,出現(xiàn)明顯的噬神經(jīng)現(xiàn)象,并有部分神經(jīng)纖維斷裂。4.大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞經(jīng)透射電鏡掃描顯示,對照組雛雞神經(jīng)元細(xì)胞膜、核膜完整,染色質(zhì)分布均勻,線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)、結(jié)構(gòu)及周圍突起正常;低劑量組腦神經(jīng)元胞體出現(xiàn)輕度變性,主要表現(xiàn)為神經(jīng)細(xì)胞膜、核膜完整,染色質(zhì)分布均勻,部分線粒體出現(xiàn)空泡變性,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)展、斷裂,核糖體減少;中劑量組腦神經(jīng)元胞體出現(xiàn)嚴(yán)重變性,主要表現(xiàn)為神經(jīng)細(xì)胞膜、核膜完整,胞體腫脹,細(xì)胞核正常,胞漿腫脹,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)展、斷裂、減少,核糖體減少,線粒體空泡變性、減少;高劑量組腦神經(jīng)元胞體出現(xiàn)水樣變性甚至壞死,主要表現(xiàn)為胞體腫脹,部分神經(jīng)細(xì)胞膜、核膜被破壞,胞漿嚴(yán)重腫脹,線粒體腫脹、嵴間隙增寬,部分細(xì)胞器消失。5.與對照組相比,中劑量組和高劑量組雛雞神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度([Ca~(2+)]i)和腦組織中鈣調(diào)蛋白(Calmodulin,CAM)含量顯著降低(P0.05),低劑量組兩項指標(biāo)差異不顯著(P0.05);與對照組相比,不同劑量試驗(yàn)組CAM mRNA基因相對表達(dá)量顯著降低(P0.05),但各劑量組之間差異不顯著(P0.05);經(jīng)高效液相色譜-熒光檢測法檢測后,發(fā)現(xiàn)雞腦組織中未檢測到神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺吲哚乙酸(Serotonin indole acetic acid,5-HIAA),與對照組相比,試驗(yàn)組腦組織中神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素(Norepinephine,NE)和5-羥色胺(Serotonin,5-HT)含量均有升高的趨勢,多巴胺(Dopamine,DA)有降低趨勢,但差異不顯著(P0.05)。綜上所述,一定劑量的DON可引起雛雞腦組織形態(tài)結(jié)構(gòu)變化,損傷神經(jīng)元細(xì)胞,降低神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)[Ca~(2+)]i和腦組織內(nèi)CAM含量及其m RNA相對表達(dá)量,表明DON對雛雞具有神經(jīng)毒性作用。
[Abstract]:The results showed that : 1 . At the end of the experiment , 20 chickens were randomly divided into 4 groups , the concentration of DON in the test group was up to 94.01 % . In comparison with the control group , the contents of intracellular free calcium ( Ca ~ ( 2 + )) ~ ( i ) and calcium - regulated protein ( CAM ) in brain tissues decreased significantly ( P0.05 ) . In conclusion , a dose of DON could induce morphological changes of brain tissue , damage neuron cells , decrease the content of intracellular Ca ~ ( 2 + ) and the relative expression of CAM in brain tissue and its mRNA relative expression , suggesting that DON has neurotoxic effect on chicks .

【學(xué)位授予單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S859.8

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本文編號：1890378